[發明專利]一種基于蛋白片段互補技術的PGI檢測試劑盒、制備及使用方法

在審

• 申請號: 201711271968.8
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN108279306A
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發明（設計）人: 徐林
• 申請（專利權）人: 南京天縱易康生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/544;G01N33/573
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• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種基于蛋白片段互補技術的PGI診斷試劑盒。所述試劑盒包括：抗PGI抗體偶聯的酶蛋白N端片段、抗PGI抗體偶聯的酶蛋白C端片段和酶的反應底物；本發明還公開了所述一種基于蛋白片段互補技術的PGI診斷試劑盒的制備方法，該方法包括：抗PGI抗體偶聯的酶蛋白N端片段的制備、抗PGI抗體偶聯的酶蛋白C端片段的制備；最后還公開了該試劑盒的使用方法；本發明試劑盒具有操作簡單、特異性好、免清洗、精確度高等優點，便于臨床檢測使用，可預警胃癌發生，對預防胃癌具有相當重要的意義，具有極大的市場價值。

技術領域

本發明涉及一種蛋白片段互補技術用于體外免疫診斷檢測人體內PGI的含量，屬于疾病診斷檢測領域。

背景技術

胃癌是全球的第四大常見癌癥，是第二大癌癥死因，僅次于肺癌。中國的胃癌發病率已超過日本，并且呈上升趨勢。胃癌若能早期診斷，5年生存率一般超過90％，若診斷時已是晚期，5年生存率可能僅為10％-20％。一項回顧性研究證明90％以上的胃癌患者合并有萎縮性胃炎。普遍認為萎縮性胃炎是很重要的癌前病變，在癌癥的發病機制中起著至關重要的作用。

胃蛋白酶原是胃液中胃蛋白酶沒有消化活性的前體物質，分為胃蛋白酶原I(PGI)和胃蛋白酶原II(PGII)兩類，大部分的胃蛋白酶原進入胃腔，只有極少量(約1％)透過毛細血管進入血液，血清中的濃度反映了其分泌水平。其中PGI主要由胃腺的主細胞和黏液頸細胞分泌，PGI是檢測胃泌酸腺細胞功能的指針，胃酸分泌增多PGI升高，分泌減少或胃粘膜腺體萎縮PGI降低。萎縮性胃炎是胃癌的主要癌前病變，當發生萎縮性胃炎時，腺體和主細胞數量減少，引起胃蛋白酶原I分泌下降。由于在淺表性胃炎-胃粘膜糜爛潰瘍-萎縮性胃炎-胃癌的發展過程中，均伴隨著胃蛋白酶原的變化，胃蛋白酶原不僅成為這三種病變的良好診斷析指標，而且是治療和預防干預過程中最要的監測指標。

PGI檢測試劑盒用于檢測血清或者血漿中的胃蛋白酶原I的含量，具有簡便、快速的優勢，避免了X-射線對人體的侵害和胃鏡的不便。常規的PGI的測定主要采用的是免疫抑制法以及酶聯免疫吸附法，免疫抑制法檢測迅速、省時，有較高的敏感性，但是影響因素和缺陷眾多。酶聯免疫吸附法具有操作簡單，試劑穩定期長的特點，但檢測靈敏度較低。為解決上述問題，利用蛋白片段互補技術，以PGI的抗體構建技術平臺，研發出一種簡便、直觀、靈敏的PGI快速檢測試劑。將其應用于檢測胃泌酸腺細胞功能的檢測，可提高萎縮性胃炎診斷的準確率，具有極大的市場價值。

發明內容

針對現有技術中存在的技術問題，本發明提供一種可用于定量檢測PGI的檢測試劑盒、其制備及使用方法。

本發明通過以下技術方案實現：

一種制備基于蛋白片段互補技術PGI檢測試劑盒的方法，包括如下步驟：

1)抗PGI抗體偶聯酶蛋白N端片段；

2)抗PGI抗體偶聯酶蛋白C端片段；

在上述技術方案中，所述抗PGI抗體為針對PGI不同表位的單克隆抗體或多克隆抗體。

在上述方案中，所述抗PGI抗體偶聯酶蛋白N端片段的步驟中，酶蛋白N端片段與抗PGI抗體的質量比為1∶1-10。

在上述方案中，所述抗PGI抗體偶聯酶蛋白C端片段的步驟中，酶蛋白C端片段與抗PGI抗體的質量比為1∶1-10。

根據以上任一技術方案所述所制備的基于蛋白片段互補技術的PGI檢測試劑盒。其主要組成包括：

1)抗PGI抗體偶聯的酶蛋白N端片段；

2)抗PGI抗體偶聯的酶蛋白C端片段。

以上任一技術方案所述的試劑盒的使用方法，其特征在于：包括如下步驟：