[發(fā)明專利]一種防治松材線蟲的生物農(nóng)藥及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711262078.0
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN107926987B
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋瑞清;張壤心;逯昕明;梁英輝;宋倩;魏珊珊
• 申請（專利權(quán)）人: 東北林業(yè)大學
• 主分類號: A01N63/38
• 分類號: A01N63/38;A01N25/12;A01P5/00
• 代理公司: 長沙星耀專利事務(wù)所(普通合伙) 43205
• 代理人: 許伯嚴

本發(fā)明涉及一種防治松材線蟲的生物農(nóng)藥及其制備方法，以及其在防治松材線蟲方面的應(yīng)用。該農(nóng)藥的劑型為粉劑，該粉劑的活性成分為綠木霉（Trichoderma virens）T43發(fā)酵液正丁醇提取物，該粉劑是通過將發(fā)酵液過濾、離心，取上清液，加正丁醇混合萃取，棄水層，將正丁醇層蒸發(fā)濃縮得到的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種防治松材線蟲的生物農(nóng)藥，該農(nóng)藥提取于抑制松材線蟲生防真菌—綠木霉(Trichoderma virens)T43發(fā)酵液中抑菌代謝產(chǎn)物，還涉及及其制備方法，尤其是涉及綠木霉(Trichoderma virens)T43液體發(fā)酵工藝流程和活性成分的分離提取方法，以及其在防治松材線蟲方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

松材線蟲病(Bursaphelenchus xylophilus)是松樹的毀滅性病害，樹木患病后死亡率極高，防治難度大，能造成相當嚴重的經(jīng)濟損失和非常重大的生態(tài)災(zāi)難，在林業(yè)經(jīng)濟和自然景觀上有著很大的威脅，在世界各國有著頭號植物檢疫對象之稱。對于防治松材線蟲，歷來以化學藥劑為主，而化學藥劑帶來的負面影響，使得生物防治的研究成為熱點。真菌農(nóng)藥具有毒性低，選擇性強，高效低殘留，對環(huán)境造成的危害低等特點。國內(nèi)外研究表明綠木霉對多種病害具有抑制作用。說明綠木霉T43在液體發(fā)酵過程中，可以代謝出多種抑菌活性成分。但針對綠木霉(Trichoderma virens)T43進行生物防治的研究比較多的集中于拮抗作用、抑菌成分、抑菌機理等方面，對于綠木霉殺松材線蟲活性成分防治松材線蟲的生防菌劑的制備方法，經(jīng)檢索未發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明相關(guān)的報道。

綠木霉(Trichoderma virens)在Ainsworth(1973)系統(tǒng)中屬于半知菌亞門(Deuteromycotina)，絲孢綱(Hyphomycetes)，絲孢菌目(Hyphoales)，絲孢菌科(Hyphoaceae)，木霉屬(Trichoderma)。綠木霉(Trichoderma virens)T43是一株廣譜高效拮抗木霉菌株，對多種林木病原菌包括樟子松枯梢病菌(Sphaeropsis sapinea)、楊樹爛皮病菌(Cytospora chrysosperma)、楊樹葉枯病菌(Alternaria alternata)、沙棘干縮病菌(Fusarium sporotrichoides)、苗木立枯病菌(Rhizoctonia solani、Fusariumoxysporum、Pythium debaryanum)、松爛皮病菌(Cenangium ferruginosum)均有較好的抑制效果，其發(fā)酵液及乙酸乙酯提取物對松球殼孢菌室內(nèi)生長抑制率分別為92.94％和90.58％，易培養(yǎng)，功效高。將此菌株應(yīng)用到松材線蟲防治還是首次。因此有必要開發(fā)一種高效、低毒、無公害的、穩(wěn)定、便于保存的防治松材線蟲的綠木霉生物農(nóng)藥。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種防治松材線蟲的生物農(nóng)藥及其制備方法，以及其在防治松材線蟲方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一方面，提供了一種防治松材線蟲的生物農(nóng)藥，其特征在于，該農(nóng)藥的劑型為粉劑，該粉劑的活性成分為綠木霉(Trichoderma virens)T43發(fā)酵液正丁醇提取物，該粉劑是通過將發(fā)酵液過濾、離心，取上清液，加正丁醇混合萃取，棄水層，將正丁醇層蒸發(fā)濃縮得到的。

另一方面，具體的制備工藝如下：

1.制備PDA培養(yǎng)基

按照改良的PDA培養(yǎng)基制備方法。配方：馬鈴薯180-220g，葡萄糖18-22g，硫酸鎂1-2g，磷酸二氫鈉2-4g，瓊脂18-22g，水1000mL，制作1L液體。分別裝于500mL的錐形瓶中，每瓶大約裝250mL。將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶放入高壓滅菌器中(118-124℃)下滅菌18-22min。

2.接種