[發明專利]積雪草苷的提取方法

在審

• 申請號: 201711229397.1
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107936081A
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發明（設計）人: 陶坤秀
• 申請（專利權）人: 陶坤秀
• 主分類號: C07J63/00
• 分類號: C07J63/00
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司45107
• 代理人: 李瑛

技術領域

本發明屬于生物提取技術領域，具體涉及一種從積雪草苷的提取方法。

背景技術

積雪草為傘形科植物積雪草(Centella asiatica(L.)Urban)的干燥全草，廣泛分布于長江流域以南各地，全草入藥，常年可采，資源豐富，在許多國家的醫藥領域中應用已有幾千年歷史，其始載于《神農本草經》，列為中品，性寒，味苦，辛，具有清熱利濕、解毒消腫之功效，主要用于濕熱黃疸、中暑腹瀉、癰腫瘡毒、跌打損傷等。積雪草中的化學成分包括三萜皂苷、三萜酸、多炔烯類和揮發油等。現代研究證明，積雪草提取物可有效促進皮膚損傷、局部膠原合成代謝，并在皮膚損傷后的組織修復方面有中藥作用。近年來研究還發現，積雪草具有抗氧化、抗抑郁、保肝、抑制腫瘤細胞增生等作用。積雪草中起主要藥理作用的成分是三萜類化合物，因此活性成分提取分離研究主要集中在更快更好的分離純化積雪草苷和羥基積雪草苷。常規皂苷的提取方法種類很多，一般以溶劑提取為主，包括浸提法、回流法、煎煮法等，近年來又新報道了一些提取方法，包括微波法、酶法等，也獲得了廣泛的關注。在純化方面，常規的柱層析法純化皂苷仍占據主流，其他方法如色譜法，但由于耗材較多，成本高而很少利用。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供一種積雪草苷的提取方法，該方法提取得到的積雪草苷收率大，純度高。

本發明提供的技術方案是提供一種積雪草苷的提取方法，包括以下步驟：

1)將積雪草粉碎加水回流提取，將提取液過濾，得到粗提液；

2)將粗提液上XAD-10大孔樹脂柱，用pH值為2～4的酸液洗脫，合并流出液和酸洗液；

3)調節合并液pH值至中性，過濾，將濾液再次上XAD-3大孔樹脂柱，用體積濃度為30～40％的乙醇洗脫，薄層層析跟蹤檢測，收集含有目標成分的乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得積雪草苷。

步驟1)中，水的用量為積雪草重量的5～10倍，在40～50℃下回流提取1～3次，每次0.5～1h。由于積雪草皂苷親水性強，特別是皂苷由于它們的分子中往往結合有多數糖分子，羥基數目多，能表現出一定的親水性，水為溶劑即可將其充分提取出來。

XAD-10樹脂主要吸附的是脂溶性成分，大分子極性強的物質，這些物質對樹脂的吸附性更強，大孔樹脂優先吸附這些物質而很快達到飽和。XAD-10是極性大孔樹脂，與積雪草皂苷極性相差較大，無法有效吸附積雪草苷，XAD-10樹脂平均孔徑較大，遠遠大于積雪草皂苷，也無法起到物理截留積雪草皂苷的作用，因此，積雪草皂苷會隨著流出液流出。pH值為2～4的酸液洗脫可進一步將樹脂中吸附的少量積雪草皂苷洗脫下來，避免積雪草皂苷的吸附損失。步驟2)中，粗提液上柱速度為3～5BV/h。酸液的洗脫速度為1～2BV/h。

步驟3)中，XAD-3型號大孔樹脂為非極性樹脂，平均孔徑為0.44μm，比表面積256m²/g。該樹脂對積雪草皂苷有很有的吸附性能，濾液的上柱速度為0.5～1BV/h，可將積雪草皂苷吸附完全。由于積雪草苷和羥基積雪草苷存在極性差異，采用體積濃度為30～40％的乙醇洗脫，可優先洗脫積雪草苷。

與現有技術相比，本方法針對目標成分進行吸附和解吸附，提取的積雪草苷收率高達85％以上，純度高達95.0％以上。

具體實施方式

以下具體實施例對本發明作進一步闡述，但不作為對本發明的限定。

以下百分數為體積百分數。

實施例1

1)將積雪草粉碎加水，水的用量為積雪草重量的5倍，在40℃下回流提取1次，每次0.5h，將提取液過濾，得到粗提液；

2)將粗提液上XAD-10大孔樹脂柱，粗提液上柱速度為3BV/h，用pH值為2的酸液洗脫，酸液的洗脫速度為1BV/h，合并流出液和酸洗液；

3)調節合并液pH值至中性，過濾，將濾液再次上XAD-3大孔樹脂柱，濾液的上柱速度為為0.5BV/h，用體積濃度為30％的乙醇洗脫，乙醇洗脫速度為2BV/h，薄層層析跟蹤檢測，收集含有目標成分的乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得積雪草苷。

經HLPC分析，積雪草苷的回收率為86.24％以上，純度高達95.44％。

實施例2

1)將積雪草粉碎加水，水的用量為積雪草重量的10倍，在50℃下回流提取3次，每次1h，將提取液過濾，得到粗提液；