[發明專利]用于肉牛個體及品種鑒定的AFLP引物組合產品、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201711226529.5
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107746884B
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 陳愛亮;趙杰;楊曙明;李婷婷
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 史晶晶

1.用于肉牛個體及品種鑒定的AFLP引物組合產品，其特征在于，其包含下列的引物對中的全部：

SEQ ID NO: 2和6、SEQ ID NO: 2和5、SEQ ID NO: 2和8、SEQ ID NO: 1和7、SEQ IDNO: 1和8、SEQ ID NO: 3和6、SEQ ID NO: 3和5以及SEQ ID NO: 3和8。

2.根據權利要求1所述的引物組合產品，其特征在于，每對引物對中的至少一條引物被熒光染料所標記。

3.根據權利要求2所述的引物組合產品，其特征在于，所述熒光染料選自FAM、FITC、SYBR GreenⅠ、HEX、VIC、JOE、TAMRA、TET、ROX、Cy3、Cy5、TEXAS-Red、PET、NED、Alexa Fluor、DyLight和FTM中的一種或多種。

4.用于肉牛個體及品種鑒定的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1~3任一項所述的引物組合產品、限制性內切酶、接頭序列以及預擴增引物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述限制性內切酶包括EcoRⅠ以及MseⅠ；

所述EcoRⅠ對應的接頭序列的核苷酸序列分別如SEQ ID NO: 9和10所示；

所述MseⅠ對應的接頭序列的核苷酸序列分別如SEQ ID NO: 11和12所示。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述預擴增引物的核苷酸序列分別如SEQ ID NO: 13和14所示。

7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：DNA聚合酶、DNA連接酶、水、ATP、dNTPs、PCR反應緩沖液以及酶切緩沖液中的一種或多種。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶選自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu 、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4 DNA聚合酶、Klenow片段；所述DNA連接酶為T4 DNA 連接酶、T3 DNA連接酶、T7 DNA連接酶、E.coli DNA連接酶、Taq DNA連接酶和9°N DNA連接酶。

9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述DNA聚合酶為HS^TM Taq DNA 聚合酶。

10.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述水選自雙蒸水或去離子水。

11.用于肉牛個體及品種鑒定的方法，其特征在于，包括：

使用權利要求4所述的試劑盒對待檢樣本的DNA依次進行AFLP酶切與連接反應、連接產物的預擴增以及對預擴增產物的選擇性擴增，并檢測AFLP的選擇性擴增產物；

所述肉牛個體及品種為利木贊牛、日本和牛、安多牦牛及本地黃牛品種；本地黃牛包括郟縣紅牛、南陽黃牛和魯西黃牛。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在在于，在進行所述選擇性擴增時，退火溫度為54℃~58℃。

13.根據權利要求11所述的方法，其特征在在于，所述檢測AFLP的選擇性擴增產物的方法包括：

毛細管電泳分離、聚丙烯酰胺凝膠電泳串聯銀染技術進行分離、DNA測序儀進行分離。