[發明專利]一種布拉酵母菌高密度培養方法

在審

• 申請號: 201711217430.9
• 申請日: 2017-12-22
• 公開（公告）號: CN107723251A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 惠豐立;劉開放;席志文;劉天天;霍春月;黃林娜
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12R1/85
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙)41134
• 代理人: 李靜雅

1.一種布拉酵母菌高密度培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）布拉酵母活化及種子液制備

將布拉酵母涂布于固體YEPD平板進行培養活化，選取活化后的布拉酵母接種于種子培養基中培養制得種子液；

（2）發酵罐接種和發酵培養

將種子液接種到經過滅菌處理的發酵培養基中進行發酵培養制得發酵液，用鹽酸和氫氧化鈉作為緩沖液維持發酵培養過程中的pH值；

（3）流加培養

向上述發酵液中加入流加培養基進行流加培養；

（4）發酵液處理及干燥稱重

取流加培養后的發酵液進行離心處理、烘干、稱重得布拉酵母菌體。

2.如權利要求1所述的布拉酵母菌高密度培養方法，其特征在于：所述步驟（1）中YEPD平板培養活化溫度為29-31℃，活化時間為48h，所述種子培養基為：葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母粉10g/L, 種子培養基中培養時間為20-22h。

3.如權利要求1所述的布拉酵母菌高密度培養方法，其特征在于：所述步驟（2）中種子液接種量為2-4%，發酵培養基為：葡萄糖3%-5%、硝酸鉀1%-2%、蛋白胨3%-4.5%、玉米漿1.5%-2.5%、酵母營養鹽0.2%-0.3%、磷酸二氫鉀0.05%-0.1%、硫酸鎂0.05%-0.1%，發酵培養基滅菌處理溫度為115°C，處理時間為15~20min，發酵培養過程中 pH值范圍為4.8-5.3。

4.如權利要求1所述的布拉酵母菌高密度培養方法，其特征在于：所述步驟（2）中發酵培養溫度為30-32℃，發酵培養時間為8-10h，通氣比為0.6-1.8vvm,轉速為200-600r/min，溶氧含量為35-45%。

5.如權利要求1所述的布拉酵母菌高密度培養方法，其特征在于：所述步驟（3）中流加培養基為：葡萄糖380-400g/L,蛋白胨150-200g/L,流加培養時維持發酵液中殘糖濃度為15-25g/L，發酵液中殘留氨基氮濃度為 50-60 mg/L，流加培養時間為23-25h。

6.如權利要求1所述的布拉酵母菌高密度培養方法，其特征在于：所述步驟（4）中離心處理速度為4000-5000r/min,離心時間為5-6min。