[發明專利]基于pH控制的多拉菌素發酵生產方法

有效

• 申請號: 201711215737.5
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN107723325B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 王守奎;王欣榮;王洛菊;褚以文;張效軍;翟龍飛;張新宜
• 申請（專利權）人: 山東齊發藥業有限公司
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62
• 代理公司: 北京智橋聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11560
• 代理人: 洪余節

本發明涉及微生物藥物技術領域，具體涉及基于pH控制的多拉菌素發酵生產方法。所述方法包括以下步驟：在多拉菌素產生菌初級代謝階段,通過基礎培養基使得菌絲快速生長，pH不予控制；在次級代謝階段通過補加生理堿性鹽，流加第一碳源控制pH在6.7?7.0范圍內。根據本發明的方法能夠促進多拉菌素合成的快速增加,并維持長時間的快速合成速率。本方法工藝簡單易行，易于操作,非常適合商業化生產。

技術領域

本發明涉及微生物藥物技術領域，具體涉及基于pH控制的多拉菌素發酵生產方法。

背景技術

多拉菌素(doramectin)為新一代大環內酯類抗寄生蟲藥，是阿維菌素B1的環己烷羧酸(cyclohexanecarboxylicacid，CHC)前體異構物(即25-環己烷基阿維菌素B1)，通過阿維鏈霉菌(Streptomyces avermitilis)突變株發酵過程中添加環己烷羧酸為前體可生物合成多拉菌素。因多拉菌素具有抗寄生蟲范圍廣泛(臨床中共有3綱12目73屬寄生蟲對其敏感)、效果顯著，給藥途徑易于掌握，生物利用度高、藥物殘效期長等優勢，已在獸醫臨床應用于牛、馬、綿羊、山羊、豬、駱駝、犬等哺乳動物。多拉菌素的結構式如下：

微生物的發酵過程一般分為初級代謝和次級代謝兩個階段。在初級代謝階段，主要滿足菌絲體的生長，需要提供快速生長所需的基本原料如葡萄糖和磷酸鹽，當然還包括易于利用的氮源。多拉菌素生產菌株阿維鏈霉菌在pH7.0附近可以快速生長。隨著菌體快速生長，初級代謝產生的大量有機酸使發酵液pH逐漸下降，發酵過程進入次級代謝階段。多拉菌素的生物合成需要合適的pH范圍，過高或過低的pH值均不利于目標產物的合成。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種基于pH控制的多拉菌素發酵生產方法，通過在多拉菌素產生菌發酵過程的不同階段控制不同的pH范圍，獲得了合成速率快、發酵產量高的多拉菌素發酵工藝。

本發明的具體技術方案如下：

本發明提供了一種基于pH控制的多拉菌素發酵生產方法，包括以下步驟：

在多拉菌素產生菌初級代謝階段,通過基礎培養基使得菌絲快速生長，pH不予控制；在次級代謝階段通過補加生理堿性鹽，流加第一碳源控制pH在6.7-7.0范圍內。

根據本發明的一個實施方式，所述基礎培養基含有磷酸鹽和第二碳源。

根據本發明的一個實施方式，所述生理堿性鹽選自磷酸三鎂、磷酸三鎂水合物(例如四水磷酸三鎂、五水磷酸三鎂等)、醋酸鉀和醋酸鈉等的一種以上。

根據本發明的一個實施方式，所述第一碳源選自淀粉、葡萄糖、糊精、麥芽糖和麥芽糊精中的一種以上。

根據本發明的一個實施方式,在次級代謝階段，相對每升發酵液，所述生理堿性鹽的添加量為不大于3克/L，所述第一碳源的添加量為30-60克/L。

根據本發明的一個實施方式，所述磷酸鹽選自磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸三鎂、磷酸三鎂水合物中的一種以上。

根據本發明的一個實施方式，所述第二碳源選自淀粉、葡萄糖、麥芽糖、糊精、麥芽糊精中的一種以上。

根據本發明的一個實施方式，每升所述基礎培養基中，所述磷酸鹽的添加量為2-9克/L，所述第二碳源的添加量為90-110克。

根據本發明的一個實施方式，每升所述基礎培養基中還包含黃豆餅粉5-20克、棉籽餅粉5-20克、碳酸鈣1-5克、氯化鈉0.5-1.5克、消泡劑0.6-1.0克，余量為水。

根據本發明的一個實施方式，在初級代謝階段和次級代謝階段的培養條件均為：培養溫度27.5-29.5℃，攪拌轉速80-220rpm，空氣流量1:0.5-0.8vvm。