[發明專利]一種芽孢桿菌發酵培養基、發酵方法及應用

有效

• 申請號: 201711203833.8
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107699530B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 劉坤;王健;孫忠科;梁明現
• 申請（專利權）人: 周口師范學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07;C12R1/10;C12R1/125
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 韓曉娟

本發明屬于微生物培養基質技術領域，具體公開了一種芽孢桿菌發酵培養基、發酵方法及應用。由以下質量百分比的組分制成：氮源8?15％、蔗糖8?15％、添加劑0.1?0.5％、消泡劑0.1?0.2％，余量為水；所述氮源為有機氮源與無機氮源的混合物；所述添加劑為酵母提取物、玉米漿干粉、蛋白胨、賴氨酸、吲哚乙酸中的一種或者幾種；所述消泡劑為吐溫80或者硅類消泡劑。本發明采用特殊的培養基材料、配比，無需預先對培養用的芽孢桿菌種子進行活化及對種子較為嚴格的無菌保存，方便現場操作；發酵液中有效菌落數高，制備的發酵液直接使用，為芽孢桿菌營養體和芽孢的混合狀態，使用效果得到顯著提升，避免了發酵液二次加工造成的微生物流失。

技術領域

本發明屬于微生物培養基質技術領域，具體涉及一種芽孢桿菌發酵培養基、發酵方法及應用。

背景技術

化學農藥大量使用導致食品的農藥殘留和已經由此造成的環境污染問題，嚴重威脅人類健康。另外，大量化學農藥的使用，容易使植物病原菌、蟲產生抗藥性，從而降低了防治效果。生物農藥因無公害、環境友好、不產生抗性等特點，被認為是化學農藥較理想的替代品。

芽孢桿菌是植物葉表和根際有益微生物，同時還是植物體內常見的內生細菌。芽孢桿菌通過拮抗作用、競爭作用、誘導抗性等機制達到植物病蟲害防治、促進植物生長的作用。

現有技術存在的問題是，當前芽孢桿菌菌劑的使用普遍采用發酵后回收芽孢，制備成各種劑型使用，一方面丟棄了發酵液中產生的對病蟲害有效的生物活性物質，而且芽孢的萌發需要一定時間，與現場發酵的微生物菌劑相比，使用效果大大降低；且在加工、儲藏及使用過程中有效活菌數也有所降低。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供的一種芽孢桿菌發酵培養基、發酵方法，保留芽孢桿菌發酵液，減少了現有芽孢桿菌生產過程中有效活菌數降低的問題。

本發明的第一個目的是提供一種芽孢桿菌發酵培養基，由以下質量百分比的組分制成：氮源8-15％、蔗糖8-15％、添加劑0.1-0.5％、消泡劑0.1-0.2％，余量為水；

所述氮源為有機氮源與無機氮源的混合物；所述添加劑為酵母提取物、玉米漿干粉、蛋白胨、賴氨酸、吲哚乙酸中的一種或者幾種；所述消泡劑為吐溫80或者硅類消泡劑。

優選的，上述芽孢桿菌發酵培養基中，所述有機氮源為豆粕粉、黃豆粉、豆漿中的一種或幾種；所述無機氮源為硝酸銨或者硫酸銨；并且氮源中有機氮源與無機氮源的質量比例為500-1000:1。

優選的，上述芽孢桿菌發酵培養基中，所述硅類消泡劑是聚二甲氧基硅烷消泡劑或者聚醚改性硅消泡劑。

本發明的第二個目的是提供一種利用上述的芽孢桿菌發酵培養基進行發酵的方法，包括以下步驟：

步驟1，按以下質量百分比稱取各組分：氮源8-15％、蔗糖8-15％、添加劑0.1-0.5％、消泡劑0.1-0.2％，余量為水；

所述氮源為有機氮源與無機氮源的混合物；所述添加劑為酵母提取物、玉米漿干粉、蛋白胨、賴氨酸、吲哚乙酸中的一種或者幾種；所述消泡劑為吐溫80或者硅類消泡劑；

步驟2，混料：將步驟1中稱取的氮源、蔗糖、添加劑、水放入發酵設備中，混勻，滅菌，然后加入稱取的消泡劑，得到培養液，加熱培養液至35℃后，保溫20min，然后降溫至30℃備用；

步驟3，接種：將芽孢桿菌種子加入到步驟2冷卻到30℃的培養液中，得到發酵液，芽孢桿菌種子與步驟1中稱取的水的體積比例為0.08-0.1:100；

步驟4，發酵：對步驟3中的發酵液進行通空氣培養，通氣量為0.4-1.5vvm，發酵溫度為30-37℃，轉速為50r/min，培養時間為7-10d，發酵結束后得到的發酵液直接應用或者4℃保藏備用。