[發明專利]測定動物膠類中藥中的四種硝基呋喃類藥物代謝產物殘留的方法

在審

• 申請號: 201711199087.X
• 申請日: 2017-11-26
• 公開（公告）號: CN108008038A
• 公開（公告）日: 2018-05-08
• 發明（設計）人: 勵炯;賈彥博;孫嵐;王紅青;林偉杰
• 申請（專利權）人: 杭州市食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.測定動物膠類中藥中的四種硝基呋喃類藥物代謝產物殘留的方法，其特征是包括以下步驟：

1)、制備待測樣品溶液：

1.1、將待測樣品粉粹機粉碎后混勻，得試樣；

1.2、稱取試樣1～5g，加入5～50ml的0.1～0.5mol/L鹽酸溶液，溶解；

1.3、在步驟1.2所得的溶解后試樣溶液中加入50～200ul的0.1～1mg/ml胃蛋白酶，同時加入50～200ul的2-硝基苯甲醛溶液，37±1℃恒溫水浴振蕩6～24h；所述2-硝基苯甲醛溶液的濃度為0.1mol/L；

1.4、在步驟1.3所得的樣品溶液中精密加入5～20ml含1～10％(v/v)甲酸的乙腈溶液，漩渦振蕩提取5～20min，加入2～10g氯化鈉和5～10g無水硫酸鈉，旋渦1～5min，以4000～8000r/min的速度離心2～10min，吸取上清液Ⅰ5ml待凈化；

1.5、在步驟1.4所得的待凈化樣液中加入凈化劑，旋渦1～5min混勻，以4000～8000r/min的速度離心2～10min；

1.6、取步驟1.5所得的上清液Ⅱ1～5ml置于PRiME HLB固相萃取柱中，取濾液用0.20～0.45um過濾頭過濾，得上清液Ⅲ；

2)、制備標準溶液

2.1、用有機溶劑分別將4種硝基呋喃類藥物代謝產物標準物質溶解，配置成濃度均為1000ug/mL的4種硝基呋喃類藥物代謝產物標準儲備溶液；

2.2、各取上述標準儲備溶液用有機溶劑配制成濃度為100mg/L的混合標準儲備溶液；

2.3、分別取事先已知為陰性的粉碎后的空白樣品，加入混合標準儲備溶液后，按照步驟1)所述方法制備基質標準溶液，作為標準系列工作溶液；

3)、將標準系列工作溶液注入液質聯用儀，確定4種硝基呋喃類藥物代謝產物的出峰位置及其定性定量離子對，以定量離子對豐度為縱坐標，以濃度為橫坐標，制作標準曲線方程；

4)、取步驟1)所得的上清液Ⅲ按步驟3)方法測定上清液中各硝基呋喃類藥物、峰面積及其定量定性離子對，根據各出峰時間以及定性定量離子對豐度比進行定性分析，按照步驟3)所得的標準曲線方程計算，得到待測樣品中各硝基呋喃類藥物代謝產物的含量。

2.根據權利要求1所述的測定動物膠類中藥中的四種硝基呋喃類藥物代謝產物殘留的方法，其特征是：

所述4種硝基呋喃類藥物代謝產物：呋喃唑酮代謝物、呋喃它酮代謝物、呋喃西林代謝物、呋喃妥因代謝物；

步驟3)的色譜條件為：

流速：0.3～0.8ml/min；柱溫：20～50℃；進樣量0.5～5μL；

流動相由流動相A和流動相B組成：流動相A為乙腈；流動相B為體積濃度為0.0005mol/L乙酸銨水溶液；

梯度洗脫程序為：0～3.5min，5％A；3.5～3.51min，5～25％A；3.51～5.80min，25％A；5.80～5.81min，25～5％A；5.81～8min，5％A；

上述％為體積％。

3.根據權利要求2所述的測定動物膠類中藥中的四種硝基呋喃類藥物代謝產物殘留的方法，其特征是：

所述步驟3)的質譜條件為：電噴霧離子源，正離子檢測方式；多反應檢測；干燥氣溫度：200℃；干燥氣流速：14L/min；噴霧器壓力：200KPa；毛細管電壓：3.5KV；校準方法：質量軸自動調諧校正；MRM進行分段掃描：0～4.8min，SEM和AHD；4.8～5.3min，AOZ；5.3～8min，AMOZ。

4.根據權利要求3所述的測定動物膠類中藥中的四種硝基呋喃類藥物代謝產物殘留的方法，其特征是4種硝基呋喃類藥物代謝產物質譜分析參數如下：

*為定量離子對。