[發(fā)明專利]一種靶向CD20的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711196327.0
• 申請(qǐng)日: 2017-11-25
• 公開（公告）號(hào): CN109836494A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曾瀅;張長風(fēng);吳詠東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳賓德生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強(qiáng)

本發(fā)明提供了一種靶向CD20的單鏈抗體，所述靶向CD20的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD20的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。本發(fā)明還提供了一種包括所述靶向CD20的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細(xì)胞，所述靶向CD20的嵌合抗原受體可以專一性地靶向CD20，尤其可以靶向到不表達(dá)CD19的腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)T細(xì)胞在患者體內(nèi)的擴(kuò)增，高效且特異性的殺傷腫瘤細(xì)胞。此外，人源化單鏈抗體制得的靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞具有更好的維持細(xì)胞的活力和殺傷力。本發(fā)明還提供了一種靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法和應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)生物領(lǐng)域，特別涉及一種靶向CD20的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

CAR-T(嵌合抗原受體T細(xì)胞)技術(shù)是一種新型細(xì)胞療法，它是將經(jīng)過CAR改造的T細(xì)胞回輸至人體，激活自身免疫系統(tǒng)，對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷，在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治療上有著顯著的療效，被認(rèn)為是目前最有效的惡性腫瘤的治療方式之一。

目前CAR-T技術(shù)在CD19陽性血液瘤(如B細(xì)胞淋巴瘤、急慢性B淋巴細(xì)胞白血病)中取得了令人矚目的效果。但由于同類的腫瘤常表達(dá)各不相同的免疫表型，舉例來說，當(dāng)腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)CD19陰性逃逸，即，存在不表達(dá)CD19的腫瘤細(xì)胞，則CD19靶點(diǎn)失效，而CART-CD19無法再發(fā)揮抗腫瘤效果，因此，有必要提供能靶向惡性腫瘤的其他廣泛表達(dá)靶點(diǎn)的CAR-T細(xì)胞。此外，CAR-T細(xì)胞的在體維持能力(persistence)是CAR-T長期療效的保證，但實(shí)際上CAR-T在回輸后幾天到幾周就完全消失，而未能發(fā)揮長效持久的殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種靶向CD20的單鏈抗體，以及包括所述靶向CD20的單鏈抗體的嵌合抗原受體T細(xì)胞。所述靶向CD20的嵌合抗原受體可以專一性地靶向CD20，促進(jìn)T細(xì)胞在患者體內(nèi)擴(kuò)增，高效且特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞，同時(shí)人源化單鏈抗體制得的靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞能夠持久地維持其自我更新能力和腫瘤殺傷力。本發(fā)明還提供了一種靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法和應(yīng)用。

第一方面，本發(fā)明提供了一種靶向CD20的單鏈抗體，所述靶向CD20的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD20的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。

可選的，所述靶向CD20的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可選的，所述靶向CD20的單鏈抗體編碼基因應(yīng)該考慮簡并堿基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的編碼基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保護(hù)范圍還應(yīng)該保護(hù)與SEQ ID NO:2具有堿基簡并性質(zhì)的核苷酸序列，這些核苷酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列仍然為SEQ ID NO:1。

CD20屬于非糖基化磷酸蛋白，是血液系統(tǒng)中B細(xì)胞的特異性靶標(biāo)，但并不在早期前體B細(xì)胞和漿細(xì)胞上表達(dá)。CD20可參與B細(xì)胞的免疫應(yīng)答，包括非T細(xì)胞依賴的抗原-抗體反應(yīng)等。本發(fā)明第一方面提供的所述靶向CD20的單鏈抗體能夠與CD20蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，并促進(jìn)帶該單鏈抗體的免疫細(xì)胞等對(duì)表達(dá)CD20的腫瘤細(xì)胞的識(shí)別，尤其可以靶向到不表達(dá)CD19的腫瘤細(xì)胞。此外，所述靶向CD20的單鏈抗體為人源化單鏈抗體，可以避免引起人機(jī)體的免疫反應(yīng)。

第二方面，本發(fā)明提供了一種靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞，包括靶向CD20的嵌合抗原受體CAR-CD20，所述CAR-CD20包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向CD20的單鏈抗體、胞外鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號(hào)區(qū)的氨基酸序列，其中所述靶向CD20的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。