[發(fā)明專利]一種靶向CD20的單鏈抗體、嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711196327.0 | 申請日： | 2017-11-25 |
| 公開（公告）號： | CN109836494A | 公開（公告）日： | 2019-06-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 曾瀅;張長風(fēng);吳詠東 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳賓德生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/28 | 分類號： | C07K16/28;C12N15/13;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61P35/00 |
| 代理公司： | 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝傳鑫;熊永強(qiáng) |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 靶向 單鏈抗體 嵌合抗原 制備方法和應(yīng)用 殺傷腫瘤細(xì)胞 氨基酸序列 腫瘤細(xì)胞 人源化 專一性 單鏈 擴(kuò)增 源化 體內(nèi) 細(xì)胞 | ||
1.一種靶向CD20的單鏈抗體，其特征在于，所述靶向CD20的單鏈抗體包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD20的單鏈抗體為人源化單鏈抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的靶向CD20的單鏈抗體，其特征在于，所述靶向CD20的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。
3.一種靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，包括靶向CD20的嵌合抗原受體CAR-CD20，所述CAR-CD20包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向CD20的單鏈抗體、胞外鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號區(qū)的氨基酸序列，其中所述靶向CD20的單鏈抗體包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。
4.如權(quán)利要求3所述的靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，所述CAR-CD20的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。
5.一種重組病毒載體，其特征在于，所述重組病毒載體包括如權(quán)利要求3或4任一項所述的靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞的CAR-CD20的編碼基因序列。
6.如權(quán)利要求5所述的重組病毒載體，其特征在于，所述CAR-CD20的編碼基因序列包括如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。
7.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞包括如權(quán)利要求5或6任一項所述的重組病毒載體。
8.一種靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括：
(1)提供靶向CD20的嵌合抗原受體CAR-CD20的編碼基因，包括從5’端到3’端順次連接的信號肽的編碼基因、靶向CD20的單鏈抗體的編碼基因、CD8α鉸鏈區(qū)的編碼基因、CD8跨膜區(qū)的編碼基因、4-1BB信號區(qū)的編碼基因和CD3ζ信號區(qū)的編碼基因；所述靶向CD20的單鏈抗體為人源化單鏈抗體，所述靶向CD20的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；
(2)將所述CAR-CD20的基因序列插入到pWPXLD載體中，得到pWPXLD-CAR-CD20重組質(zhì)粒；
(3)將所述pWPXLD-CAR-CD20重組質(zhì)粒與包膜質(zhì)粒、包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，得到重組慢病毒；
(4)將所述重組慢病毒轉(zhuǎn)染CD3陽性T淋巴細(xì)胞，獲得靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞。
9.如權(quán)利要求8所述的靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法，其特征在于，所述包膜質(zhì)粒為PMD2G，所述包裝質(zhì)粒為psPAX2，所述宿主細(xì)胞為HEK293T細(xì)胞。
10.一種如權(quán)利要求1-2任一項所述的靶向CD20的單鏈抗體、如權(quán)利要求3-4任一項所述的或如權(quán)利要求8-9任一項所述的制備方法制得的靶向CD20的嵌合抗原受體T細(xì)胞、或如權(quán)利要求5-6任一項所述的重組病毒載體或如權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞在制備預(yù)防、診斷和治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
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