[發(fā)明專利]用于核酸檢測(cè)的痰液收集管及痰液保存方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711190683.1
• 申請(qǐng)日: 2017-11-24
• 公開（公告）號(hào): CN107904152B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳燃;曹文靜;宣金聰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江今復(fù)康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12M1/26
• 分類號(hào): C12M1/26;C12M1/24;C12Q1/6806
• 代理公司: 杭州裕陽聯(lián)合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 姚宇吉

本發(fā)明提供了一種用于核酸檢測(cè)的痰液收集管及痰液保存方法，痰液收集管內(nèi)置核酸酶抑制劑，pH值維持劑和脫水劑。本發(fā)明針對(duì)痰液樣本中核酸易降解的問題，設(shè)計(jì)一種含有核酸保護(hù)劑的收集管，方便需要做痰液核酸檢測(cè)的受檢者在有痰時(shí)利用隨身攜帶的收集管隨時(shí)收集痰液，同時(shí)能夠在室溫條件下保護(hù)痰液樣本中的核酸不被降解，給予受檢者充足的時(shí)間(72小時(shí))將樣本送至(或快遞)醫(yī)院或其他檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行核酸檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本方法屬于用于醫(yī)學(xué)檢測(cè)的樣本保存技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于核酸檢測(cè)的痰液保存方法及收集管，技術(shù)關(guān)鍵在于保護(hù)痰液樣本中的核酸不被降解。

背景技術(shù)

痰是人體呼吸道的分泌物，它是通過支氣管纖毛運(yùn)動(dòng)上皮纖毛的運(yùn)動(dòng)，從肺部向上呼吸道推動(dòng)，最后，通過人的正常咳嗽反射從氣管內(nèi)咳出排出體外，正常人痰很少，只是保持呼吸道濕潤而分泌的少量粘液。當(dāng)人吸入刺激性氣體、塵埃、致病細(xì)菌、病毒等有害微生物時(shí)，上呼吸道就可能發(fā)生炎癥；或者肺部發(fā)生疾病，如支氣管擴(kuò)張、肺膿腫、肺癌等，呼吸道就會(huì)分泌增加，痰量就會(huì)增加，而痰的性質(zhì)也會(huì)發(fā)生變化，可以由粘痰變成干酪痰、血痰、黃膿痰等。根據(jù)痰液產(chǎn)生和排出機(jī)制可知，痰液中包含多種病原微生物、各類炎癥細(xì)胞、脫落壞死的黏膜上皮細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞等。

目前在臨床上，痰液樣本主要用于痰液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)以及呼吸道病原體檢測(cè)。其中，通過檢測(cè)痰液樣本中病原體的核酸來鑒定病原體的種類是目前最精準(zhǔn)且最快速的呼吸道病原體診斷方法。可引起急性呼吸道感染的病原體中，病毒占主要地位，其次才是細(xì)菌、支原體、霉菌、原蟲等。在原發(fā)的急性上呼吸道感染中，病毒感染高達(dá)90％以上。常見的呼吸道病原體有：結(jié)核分枝桿菌、呼吸道合胞病毒、腺病毒、EB病毒、流感病毒、肺炎支原體、風(fēng)疹病毒、鏈球菌、葡萄球菌、肺炎衣原體、細(xì)小病毒B19、巨細(xì)胞病毒以及冠狀病毒等。傳統(tǒng)的病原體診斷方法是分離培養(yǎng)或者血清學(xué)檢測(cè)，分離培養(yǎng)耗時(shí)長、操作復(fù)雜，不適用于臨床急癥的診斷；血清學(xué)檢測(cè)很難在疾病做到早期診斷。隨著熒光定量PCR以及多重PCR技術(shù)在病原體檢測(cè)領(lǐng)域的快速發(fā)展，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、檢測(cè)迅速、檢出率高等特點(diǎn)，該技術(shù)已逐漸在臨床診斷領(lǐng)域占據(jù)重要地位。此外，從肺癌高危人群及肺癌患者的痰液樣本中提取核酸，可用于早期肺癌的預(yù)測(cè)以及肺癌患者的基因突變檢測(cè)和治療監(jiān)測(cè)。綜上，痰液樣本中核酸檢測(cè)在臨床上具有重要意義。然而在實(shí)際操作中，痰液樣本中的核酸(尤其是RNA)極不穩(wěn)定，通常在溫室條件下數(shù)小時(shí)就被降解。造成核酸降解的外界物理因素如溫度、濕度、紫外線等；化學(xué)因素如強(qiáng)酸或強(qiáng)堿環(huán)境、水解反應(yīng)等；生物因素如酶解及微生物侵染等。其中，痰液中細(xì)胞破裂釋放的核酸酶以及操作過程中因污染引入的核酸酶是造成核酸降解的主要原因。此外，一般受檢者，即使是處于發(fā)病期的患者，也不是隨時(shí)能咳出足夠量的痰液，多半患者在晨起后痰液量較多，卻無法及時(shí)收集并保存痰液。

中國專利申請(qǐng)文件CN104263721A，公開了一種保護(hù)痰液中核酸(DNA和RNA)的痰紙及核酸提取方法，主要存在以下不足：(1)其專利所述的痰紙為方形或圓形紙片、信封式或盒式，此種痰紙易折損，不耐受外力擠壓，痰液易外溢(尤其當(dāng)痰液較多時(shí))，采集痰液后不便于隨身攜帶和運(yùn)輸；(2)其專利所述，在痰紙上浸潤了主要成分為DTT(二硫蘇糖醇)、EDTA(乙二胺四乙酸及其二鈉鹽)、Tris-HCl(三羥基氨基甲烷-鹽酸緩沖液)的核酸保護(hù)液，浸潤的保護(hù)液含量較少，不能保證痰液樣本與核酸保護(hù)液充分接觸，對(duì)痰液中核酸的保護(hù)效果一般。

此外，目前已公開的用于保護(hù)核酸或細(xì)胞的相關(guān)專利，例如中國專利申請(qǐng)文件CN105145545A公開的《用于常溫條件下長期保存和運(yùn)輸組織樣本的核酸保護(hù)液》、中國專利申請(qǐng)文件106065400A公開的《一種核糖核酸保護(hù)劑、試劑盒、應(yīng)用及保存方法》以及中國專利申請(qǐng)文件CN 104041484 A公開的《一種細(xì)胞保存液》等，這些專利涉及的技術(shù)均可用于保護(hù)組織或細(xì)胞的核酸。然而，這些專利涉及的技術(shù)對(duì)于痰液樣本的實(shí)用性較差，主要原因有：(1)痰液樣本具有粘度大、蛋白多、不易液化、易成團(tuán)等特點(diǎn)，將痰液加入常規(guī)液體保護(hù)劑后，痰液易與保護(hù)劑分層，保護(hù)劑與痰液樣本接觸面有限；(2)有些專利涉及的保護(hù)劑成分比較復(fù)雜，如含有防腐劑、緩沖劑、螯合劑、酶抑制劑、固定劑等，保護(hù)劑成分多且成本高，不適合臨床廣泛使用。