[發(fā)明專利]一種檢測肌紅蛋白免疫熒光定量試紙條

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711181761.1
• 申請日: 2017-11-23
• 公開（公告）號: CN107703313A
• 公開（公告）日: 2018-02-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何平;梁婷婷;李冰;陳潤文;周瓊?cè)A
• 申請（專利權(quán)）人: 中山市創(chuàng)藝生化工程有限公司
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司44205
• 代理人: 舒勝英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明免疫學(xué)檢測領(lǐng)域，更具體地涉及一種檢測肌紅蛋白免疫熒光定量試紙條。

背景技術(shù)

肌紅蛋白(myoglobin，MYO)是骨骼肌和心肌特異性氧結(jié)合蛋白，分子量為17.8kD，由于分子量較小，主要分布于心肌和骨骼肌組織約占肌肉總量的0.1％～0.2％。當(dāng)心肌或骨骼肌損傷時，MB會從肌肉組織釋放到循環(huán)血中，并且能經(jīng)腎小球濾過，出現(xiàn)在尿中。因此血液和尿中MB測定可用于某些肌病和心臟病的診斷，如急性心肌梗死(AMI)、急性肌損傷、急慢性腎衰竭、嚴(yán)重充血性心力衰竭、長時間休克、肌營養(yǎng)不良、肌萎縮和多發(fā)性肌炎等疾病。測定血清肌紅蛋白肌紅蛋白可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標(biāo)。但特異性差,骨骼肌損傷、創(chuàng)傷、腎功能衰竭等疾病,都可導(dǎo)致其升高。MYO陽性雖不能確診AMI,但可用于早期排除AMI診斷的重要指標(biāo),如MYO陰性,則基本排除心肌梗死,還可用于再梗死的診斷,結(jié)合臨床,如Myo重新升高,應(yīng)考慮為再梗死或者梗死延展。

目前肌紅蛋白的檢測方法主要有酶聯(lián)熒光分析法、放射免疫法、酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光等。放射免疫法有放射性物質(zhì)，會造成放射性污染；酶聯(lián)免疫法測定周期長，不適合急診的快速檢測，對操作人員有較高的專業(yè)要求；化學(xué)發(fā)光成本較高，且檢測所需儀器較為昂貴。

熒光免疫層析定量檢測技術(shù)是免疫層析技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)的結(jié)合，其具有檢測儀器精巧輕便、操作簡單迅速、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于多類抗原物質(zhì)的檢測。其中，抗體-熒光微球偶聯(lián)物實施熒光免疫層析定量檢測的關(guān)鍵分子之一，其穩(wěn)定性關(guān)乎抗原熒光定量檢測的準(zhǔn)確度及其產(chǎn)品的保存期。因此，對抗體-熒光微球偶聯(lián)物的儲存液的要求很高。因此尋找一種助穩(wěn)性能更好、能提高檢測準(zhǔn)確度、層析回收率高的儲存液對檢測肌紅蛋白非常具有現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種檢測肌紅蛋白免疫熒光定量試紙條。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種檢測肌紅蛋白免疫熒光定量試紙條，包括吸水墊、硝酸纖維素膜、質(zhì)控線、檢測線、結(jié)合墊、樣品墊、PVC底板；其中，結(jié)合墊上噴有鼠源肌紅蛋白單克隆抗體-熒光微球偶聯(lián)物；檢測線為鼠源肌紅蛋白單克隆抗體，質(zhì)控線為羊抗鼠IgG多克隆抗體，且檢測線和質(zhì)控線依次固定于硝酸纖維素膜上；樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊依次搭接并承載于PVC底板；鼠源肌紅蛋白單克隆抗體-熒光微球偶聯(lián)物使用儲存液進行浸漬處理、保存和稀釋；所述的儲存液配方為：PB的質(zhì)量濃度為15～50mM、BSA的百分濃度為1.6％～10％、Tween-80的百分濃度為0.4％～10％、葡萄糖的百分濃度為0.4％～10％、甘氨酸的百分濃度為1.5％～10％、PEG4000的百分濃度為0.8％～5％、PEG20000的百分濃度為1％～8％、Proclin300或疊氮鈉的百分濃度為0.01％～1.5％，余量為水，pH為6.5～9.0。

進一步的，所述的儲存液配方為：PB的質(zhì)量濃度為20～40mM、BSA的百分濃度為0.5％～4.8％、Tween-80的百分濃度為0.5～6.0％、葡萄糖的百分濃度為0.5～3.0％、甘氨酸的百分濃度為2.0～7.0％、PEG4000的百分濃度為1.0～3.0％、PEG20000的百分濃度為1.5～4.0％、Proclin300或疊氮鈉的百分濃度為0.03～0.1％，余量為水，pH為7.0～8.0。

上述所述試紙條的檢測方法，將該試紙條加樣層析后，檢測質(zhì)控線和檢測線的熒光信號強度，并以質(zhì)控線熒光信號強度校正檢測線的熒光信號強度，實現(xiàn)肌紅蛋白的定量檢測。

一種檢測肌紅蛋白免疫熒光定量試紙條的制備方法，包括如下步驟：

將熒光微球活化后與鼠源肌紅蛋白單克隆抗體偶聯(lián)，偶聯(lián)完畢后加入封閉劑，保存于儲存液中；

將鼠源肌紅蛋白-熒光微球偶聯(lián)物用儲存液稀釋后，噴于結(jié)合墊上，干燥保存；

將鼠源肌紅蛋白單克隆抗體固定于硝酸纖維素膜上作為檢測線，將羊抗鼠IgG多克隆抗體固定于硝酸纖維素膜上作為質(zhì)控線；

在PVC底板上依次搭接地粘貼：樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊，并剪切成適當(dāng)寬度即成為熒光免疫層析試紙條，其中，樣品墊材質(zhì)為玻璃纖維素膜或濾血膜，結(jié)合墊材質(zhì)為玻璃纖維素膜；