[發明專利]用于鑒定西藏米拉山地區大花紅景天的特異引物及鑒定方法

有效

• 申請號: 201711161778.0
• 申請日: 2017-11-21
• 公開（公告）號: CN107653340B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 劉志偉
• 申請（專利權）人: 劉志偉
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.用于鑒定西藏米拉山地區大花紅景天的特異性引物序列，其特征在于它由引物序列

5’TCCGTTGCTGAATGTCTGTC3和5’ATCAAGCATGATTGTTGCGT3’組成。

2.一種使用權利要求1所述的特異引物序列鑒定西藏米拉山地區大花紅景天品種的方法，其特征在于按如下的步驟進行：

（1）五種西藏不同海拔地區大花紅景天基因組DNA提取；所述的五種西藏不同海拔地區大花紅景天指的是：色季拉山、嘉黎、臥龍、浪卡子地區、米拉山地區的植株；

（2）基因組DNA的1%瓊脂糖凝膠電泳檢測；

（3）特異引物PCR擴增，在PCR擴增專用的離心管中加入： PCR緩沖溶液、dNTP、引物序列對：

5’TCCGTTGCTGAATGTCTGTC3’和5’ATCAAGCATGATTGTTGCGT3’

大花紅景天基因組DNA、Taq聚合酶、無菌水補至25微升，將裝有上述液體的PCR專用薄壁離心管放入PCR擴增儀中，擴增條件為： 94℃預變性300秒，94℃變性 30 秒， 56℃退火30秒、72℃延伸30秒，擴增35個循環，最后在72℃延伸600秒，擴增完成；

（4）PCR擴增產物的瓊脂糖凝膠電泳檢測：配置1%的瓊脂糖凝膠，在凝膠中加入溴化乙錠，0.5微克/毫升；在5微升擴增產物中及標準陽性Marker中分別加入1微升6×上樣緩沖液，混勻，用移液器將上述混合液分別加入浸沒TBE電泳液的瓊脂糖凝膠的點樣孔中，120V恒電壓，電泳1800秒后停止電泳，凝膠直接在紫外燈下，紫外波長265nm或在凝膠成像儀上進行觀察；

（5）結果判讀：依照標準DNA marker帶在凝膠上的位置鑒定是否為西藏米拉山地區的大花紅景天。

3.權利要求1所述的特異性引物序列在快速篩選西藏米拉山地區大花紅景天藥材方面的應用。