[發(fā)明專利]一種載藥體系的合成方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711158670.6
• 申請日: 2017-11-20
• 公開（公告）號: CN107952078B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許新華;孫麗丹;袁程;徐璐;郭蓉
• 申請（專利權(quán)）人: 三峽大學(xué)
• 主分類號: A61K47/54
• 分類號: A61K47/54;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務(wù)所 42103
• 代理人: 成鋼

本發(fā)明提供一種載藥體系的合成方法，在TM緩沖液中混合等摩爾濃度的核酸適配體Aptamer、S1、S2、S3、S4、S5、S6以及三條AS1411分子，置于PCR儀中加熱到95℃變性10 min，再迅速降到4℃，即可得到三種同時攜帶核酸適配體和AS1411的DNA四面體結(jié)構(gòu)，即Aptamer?AS1411?DNA四面體。本發(fā)明將其應(yīng)用于鼻咽癌藥物上，并具體靶向CD44⁺鼻咽癌細(xì)胞的藥物上，同時為抑制鼻咽癌5?8F細(xì)胞的增殖的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供一種具有四面體結(jié)構(gòu)的載藥體系的設(shè)計、制備及制藥用途，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是目前發(fā)病率最高的頭頸部惡性腫瘤。在世界范圍內(nèi)，其主要發(fā)病地區(qū)為中國南部、東南亞以及非洲的中東部和南部，尤其以中國南部粵語人群發(fā)病率最高，達(dá)25-30/10萬；而大多數(shù)西方國家NPC的發(fā)病率較低。NPC對射線相對敏感，部分早期NPC患者經(jīng)過單純放射治療后即可治愈；但晚期(Ⅲ、Ⅳ)NPC即使放化療結(jié)合治療，其5年生存率仍徘徊在10％～40％左右，治療效果未從根本上得到改善。難治性NPC及轉(zhuǎn)移性NPC的治療仍然存在巨大的挑戰(zhàn)。因此，對鼻咽癌新的治療方法的探索尤為重要。相對于鼻咽黏膜正常上皮細(xì)胞，鼻咽癌腫瘤細(xì)胞往往會特異性的高表達(dá)某些分子標(biāo)記。利用腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間表面分子表達(dá)的這種差異性，能夠設(shè)計特異性識別腫瘤細(xì)胞的靶向治療策略，從而提高抗腫瘤藥物在體內(nèi)的選擇性，實現(xiàn)鼻咽癌的靶向治療。

CD44蛋白是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，是一類跨膜單鏈糖蛋白，參與細(xì)胞- 細(xì)胞/基質(zhì)間的粘附，激活淋巴細(xì)胞歸巢及細(xì)胞遷移。研究發(fā)現(xiàn)，CD44在多種腫瘤細(xì)胞表面過表達(dá)并與腫瘤發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，是潛在的腫瘤治療分子靶點。研究顯示，CD44在NPC細(xì)胞中高表達(dá)并在NPC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，可用作獨立的腫瘤不良預(yù)后指標(biāo)。在本課題組的前期研究中，通過激光掃描共聚焦技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，在人鼻咽癌SUNE-1 5-8F細(xì)胞表面CD44過表達(dá)。體外實驗證實，與CD44^-細(xì)胞相比，CD44⁺細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力，以及對放化療的抵抗性。這些研究提示：CD44+鼻咽癌細(xì)胞表現(xiàn)出類腫瘤干細(xì)胞物性，靶向CD44⁺腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤治療是頗具前景的鼻咽癌精準(zhǔn)治療策略。

目前，最有效的靶向CD44的抗腫瘤策略是以抗CD44抗體作為靶頭分子，將其與抗腫瘤藥物耦聯(lián)，從而將藥物靶向傳送至CD44高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中。然而，由于Ⅰ期臨床試驗中出現(xiàn)的各種強(qiáng)烈的毒副作用，相關(guān)的臨床試驗均已被叫停。究其原因，雖然CD44分子在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，但是在正常人體組織細(xì)胞中也有表達(dá)，由于抗CD44抗體的特異性強(qiáng)，導(dǎo)致基于該策略的靶向藥物難以避免地產(chǎn)生對正常細(xì)胞的非特異性殺傷副作用。據(jù)報道，CD44存在兩種不同的狀態(tài)：正常細(xì)胞表面CD44多處于靜息態(tài)，而腫瘤細(xì)胞表面的CD44由于受到多種因素的影響而處于活化狀態(tài)。因此，如能實現(xiàn)特異性識別腫瘤細(xì)胞表面處于活化狀態(tài)的CD44，將為鼻咽癌的靶向治療提供新的契機(jī)。

核酸適配體是通過指數(shù)富集配基進(jìn)化系統(tǒng)(SELEX)篩選得到的一段單鏈/雙鏈寡聚核苷酸，它可以高親和性、高特異性地與靶蛋白結(jié)合，故可作為靶頭分子與藥物載體相連接，并促進(jìn)這些藥物靶向進(jìn)入腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞之中。目前，以核酸適配體作為靶頭分子構(gòu)建高靶向性的藥物遞送系統(tǒng)是抗腫瘤研究的熱點領(lǐng)域之一。有研究表明SELEX實驗篩選獲得的硫代修飾的DNA核酸適配體能夠特異性識別腫瘤細(xì)胞表面CD44分子，如將其作為靶頭分子將具有如下優(yōu)勢： (1)以腫瘤細(xì)胞為模型篩選獲得，因此只有活化態(tài)CD44才能與其結(jié)合，而靜息態(tài)則不能，由此避免了對正常細(xì)胞的毒副作用；(2)與天然配體相比，具有更高的靶標(biāo)親和力和特異性；(3)核酸適配體分子很小，可以在CD44介導(dǎo)下內(nèi)吞入細(xì)胞內(nèi)，將攜帶的藥物靶向遞送至腫瘤細(xì)胞內(nèi)；(4)核酸是人體天然存在的物質(zhì)，進(jìn)入人體不會導(dǎo)致強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。因此，與當(dāng)前主流的針對CD44靶向治療的抗體策略相比，基于核酸適配體的靶向治療策略具有更加廣闊的應(yīng)用前景。