[發明專利]苯酚降解微生物菌劑、固定化小球及制備方法

在審

• 申請號: 201711133505.5
• 申請日: 2017-11-15
• 公開（公告）號: CN107653209A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 席北斗;姜永海;楊昱;廉新穎;孫曉玲;馬志飛;彭星;徐祥健
• 申請（專利權）人: 中國環境科學研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N11/14;C12N11/10;C02F3/34;C12R1/38;C12R1/01;C12R1/15;C12R1/20;C02F103/06;C02F101/34
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 喻穎

1.一種苯酚降解微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)選取自來水廠的生物錳砂濾池的表層濾料，對所述表層濾料接種和活化培養制備第一菌液；

(2)將第一菌液接種至含錳MSVP液體培養基中培養，生成黑褐色顆粒物，制成第二菌液，其中，含錳MSVP液體培養基為加入有Mn²⁺濃度為20-40mg/L的MnCl₂的MSVP液體培養基，pH為7.25-7.3；

(3)將第二菌液接種至含錳MSVP固體培養基中，倒置培養，生成黑褐色顆粒物，挑取生成黑褐色顆粒物的菌落接種至1-3％TSB培養基，活化后制成微生物菌劑，其中，含錳MSVP固體培養基為加入有0.1-0.5mL Mn²⁺濃度為1g/L的MnCl₂溶液的MSVP固體培養基，pH為7.25-7.3。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，接種和活化培養方法包括以下步驟：

(11)選取的自來水廠的水源為高錳地下水，將所述表層濾料接種至加入2.38g/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液、pH為7.25-7.3的LB培養基中，活化12-24h；

(12)將活化后的菌液再次接種LB培養基中培養12-24h，制備所述第一菌液。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述第一菌液在含錳MSVP液體培養基中的接種量按體積計為1-1.5％，接種時OD600值為0.9-1.1，培養溫度為25-28℃，培養時間為12-24d；

所述步驟(3)中，所述第二菌液在含錳MSVP固體培養基中的接種量為0.5-1mL，接種時OD₆₀₀值為0.9-1.1，培養溫度為25-28℃，培養時間為10-20d；篩選的菌落在1-3％質量含量的TSB培養基中在25-28℃溫度下，活化12-24小時。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)，中含錳MSVP液體培養基成分為：(NH₄)₂SO₄0.24g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，無水CaCl₂0.06g/L，KH₂PO₄0.02g/L，Na₂HPO₄·12H₂O0.03g/L，丙酮酸鈉0.24g/L，4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.38g/L，VB₁₂0.002g/L，Mn²⁺濃度為20-40mg/L的MnCl₂，pH為7.25-7.3；

所述步驟(3)中，含錳MSVP固體培養基成分為：(NH₄)₂SO₄0.24g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，無水CaCl₂0.06g/L，KH₂PO₄0.02g/L，Na₂HPO₄·12H₂O0.03g/L，丙酮酸鈉0.24g/L，瓊脂2-5％，4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.38g/L，VB₁₂0.002g/L，Mn²⁺濃度為1g/L的MnCl₂溶液0.1-0.5mL，pH為7.25-7.3；

所述含錳MSVP固體培養基的制備方法為：向滅菌后的含有(NH₄)₂SO₄、MgSO₄·7H₂O、無水CaCl₂、KH₂PO₄、Na₂HPO₄·12H₂O、丙酮酸鈉、瓊脂的培養基中加入過0.22μm滅菌濾膜的4-羥乙基哌嗪乙磺酸和VB₁₂混勻、凝固后，加入MnCl₂溶液并使MnCl₂溶液在培養基表面涂勻，靜置使Mn²⁺滲透至培養基中。