[發明專利]一種適用于不同種源黑果枸杞一次性成苗的誘導方法

有效

• 申請號: 201711121027.6
• 申請日: 2017-11-14
• 公開（公告）號: CN107810853B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 柴成武;王方琳;李愛德;尉秋實;王祺;王昱淇;張元凱;劉克彪
• 申請（專利權）人: 甘肅省治沙研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安中科匯知識產權代理有限公司 61254
• 代理人: 韓冰

1.一種適用于不同種源黑果枸杞一次性成苗的誘導方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)誘導基質準備

大量元素溶液配制 ，按硝酸鉀3000.00mg/L、氯化鈣150.00mg/L、硫酸鎂500.00mg/L、磷酸二氫鉀150.00mg/L、硫酸銨134.00mg/L、硫酸錳10.00mg/L的配比配制 1000mL大量元素溶液；微量元素溶液配制 ，按硼酸3.0mg/L、硫酸鋅2.0mg/L、碘化鉀0.75mg/L、硫酸銅0.025mg/L、鉬酸鈉0.25mg/L的配比配制 500mL微量元素溶液；鐵鹽溶液配制 ，按Fe₂·EDTA10.00mg/L的配比配制 500mL鐵鹽溶液；有機成分溶液配制 ，按肌醇100.0mg/L、煙酸1.0mg/L、鹽酸吡哆醇1.0mg/L、鹽酸硫胺素10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L的比例配制 500mL有機成分溶液；

不定芽誘導基質制作，加入所述大量元素溶液50mL，所述微量元素溶液、鐵鹽溶液、有機成分溶液各5mL，加入6-芐基氨基嘌呤(6-BA)0.5mg、萘乙酸(NAA)0.2mg，之后加入蒸餾水定容到1000mL，混合均勻后進行蒸煮，之后加入蔗糖15g、瓊脂5g，將pH調整為5.8；制作完成后分裝三角瓶、每瓶60～70mL，高溫高壓滅菌后待用；

根系誘導基質制作，加入所述大量元素溶液25mL，所述微量元素溶液、鐵鹽溶液、有機成分溶液各2.5mL，之后加入蒸餾水定容到1000mL，混合均勻后進行蒸煮，之后加入蔗糖7.5g、瓊脂5g，將pH調整為5.8；制作完成后分裝三角瓶、每瓶60～70mL，高溫高壓滅菌后待用；

(2)不同種源黑果枸杞莖段活性誘導

于當年春季，植物內源激素活性最強時，分別剪取不同種源黑果枸杞健康母株上當年生、沒有病蟲害及牲畜啃食的健康枝條，迅速將下切口剪成馬蹄形，之后蘸取少量家用洗滌劑原液，以保證枝條的新鮮，然后帶回實驗室，用稀釋濃度為50％的吐溫80浸泡枝條1h以徹底清洗附著在枝條表面的粘性物質，之后用流動的自來水浸泡沖洗4h，沖洗之后瀝干枝條上的水分并將其放入震蕩培養箱中進行震蕩培養；

(3)滅菌處理

將經過震蕩培養后的不同種源黑果枸杞枝條置于超凈工作臺，采用75％的乙醇浸泡，浸泡期間用已滅菌的玻璃棒不斷攪動，然后用無菌水沖洗7～8次，之后將沖洗干凈的枝條放在經過高溫滅菌并鋪有濾紙的鋁盒中，用鑷子夾取濾紙充分吸干枝條表面殘留的水漬后待用；

(4)不定芽增殖

剪除經過滅菌處理的枝條兩端2～3cm，并將枝條上著生的葉片從葉柄基部剪除，之后將枝條剪成長1.5～2cm、并至少帶有一個側芽的莖段，放入培養皿，全部剪完后用鑷子輕輕夾住莖段上端垂直插入所述不定芽誘導基質中，每瓶不定芽誘導基質中只扦插1個莖段，之后封口，在25℃條件下采用黑暗和光照交替培養的方式進行不定芽增殖；

(5)根系誘導

將步驟(4)中誘導30d的不定芽從基部剪切，剪成帶有1～2個腋芽、長2cm的莖段，并將其轉接插入裝有所述根系誘導基質的三角瓶中，置于25±2℃條件下，黑暗培養4d，之后光照培養20d左右，使得根系長滿整個三角瓶瓶底，得到符合移栽標準的瓶苗；

所述光照培養的條件為光照強度2000lx，光照時間12h/d；

(6)移栽

移栽前對玻璃溫室或搭建的小拱棚進行土壤翻耕、平整、消毒、晾曬；之后將符合移栽標準的所述瓶苗連同三角瓶移至玻璃溫室或搭建的小拱棚中，將瓶口開放1/3放置1d，第2d即可完全開瓶移栽；移栽前用鑷子輕輕夾住瓶苗基部，夾出后放置在清水中，用清水沖洗干凈瓶苗基部的根系誘導基質，沖洗干凈后即可移栽至土壤中，株行距20～30cm，培養溫度為25℃左右，濕度為70％左右；生長20d左右長出5～6片新葉，生長健壯，適應性強，即可進行露地定植，步驟(2)中所述震蕩培養的震蕩方式為左右循環、頻率20r/min，溫度為28℃，震蕩時間為8h，步驟(4)中所述黑暗和光照交替培養的方式分為四個階段：第一階段，黑暗培養2d；第二階段，光照強度為2000lx的條件下培養2d，每天光照12h；第三階段，黑暗培養2d；第四階段，光照強度為2000lx的條件下培養30d，每天光照14h。

2.根據權利要1所述的適用于不同種源黑果枸杞一次性成苗的誘導方法，其特征在于，步驟(3)中所述采用75％的乙醇浸泡的時間為15～35秒，具體時間根據枝條的老嫩程度確定。

3.根據權利要求1所述的一種適用于不同種源黑果枸杞一次性成苗的誘導方法，其特征在于，步驟(6)中所述的土壤翻耕、平整、消毒、晾曬條件為：移栽前3d噴灑5％的高錳酸鉀溶液進行土壤消毒，噴灑后翻耕、晾曬3d，即可進行移栽。