[發明專利]包埋GDNF的多核-單殼微球緩釋系統的制備方法

在審

• 申請號: 201711115088.1
• 申請日: 2017-11-13
• 公開（公告）號: CN108042793A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 曾文;李維新;高國棟;孫楊
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61K38/18
• 分類號: A61K38/18;A61K9/52;A61K47/34;A61P25/00
• 代理公司: 西安弘理專利事務所 61214
• 代理人: 韓玙

本發明公開了包埋GDNF的多核?單殼微球緩釋系統的制備方法：制備出包埋GDNF的PLGA微球；將包埋GDNF的PLGA微球依次沖洗、離心及冰凍干燥；用殼聚糖粉末和冰醋酸水溶液制備殼聚糖溶液，將包埋GDNF的PLGA微球溶解于水中配成PLGA微球水溶液，將PLGA微球水溶液添加到殼聚糖溶液中制備出水相W，將液體石蠟油與表面活性劑混合制備出油相O，將水相W與油相O混合制備出水/油乳濁液W/O，將三聚磷酸鈉溶液與水/油乳濁液W/O混合制備出乳濁液；對乳濁液清洗得到包埋GDNF的多核?單殼微球緩釋系統。用本發明的方法得到的系統能中和PLGA微球的酸性降解產物，給受損神經局部提供良好的再生環境。

技術領域

本發明屬于高分子復合材料制備方法技術領域，具體涉及一種包埋GDNF的多核-單殼微球緩釋系統的制備方法。

背景技術

周圍神經(Peripheral nerve)自腦和脊髓發出，支配全身的肢體和器官，在中樞神經和相應的功能區域間發揮著傳遞神經信號的橋梁作用，包括12對腦神經和31對脊神經。在脊椎類動物的周圍神經系統(Peripheral Nervous System，PNS)中，軸突自神經元的胞體發出，內部含大量的微絲和微管，多數軸突被以雪旺細胞為主要成分的髓鞘(Myelinsheath)包裹，起到一定的絕緣作用，保證了軸突高速傳導電信號的功能；相鄰雪旺細胞間的軸突裸露在外，稱為郎飛結(Node of Ranvier)。周圍神經系統的神經纖維較之中樞神經系統(Central Nervous System，CNS)而言具有一定的再生能力，這也是區分周圍神經系統和中樞神經系統的顯著特征之一。

周圍神經組織在各種致傷因素的作用下發生一系列病理生理學變化。周圍神經受損后，遠端軸突及其髓鞘發生變性、崩解和被巨噬細胞吞噬的現象，稱為瓦勒氏變性；其中雪旺細胞分裂增殖后形成Bungner帶，具有引導再生軸突生長的作用，同時分泌多種神經營養因子包括：膠質細胞源性神經營養因子(Glial cell-derived neurotrophicfactor，GDNF)、神經生長因子(Nerve growth factor，NGF)等，加快促進軸突再生和髓鞘形成；近端軸突發出軸芽，再由間充質細胞組成的間隙中向遠端滑行，并逐漸長入遠端的Bungner帶，隨后向靶器官生長并形成突觸連接，同時雪旺細胞使軸突髓鞘化，完成周圍神經的再生過程。盡管周圍神經損傷后具有一定的自我修復能力，但大量研究已證實這種自我修復能力非常有限，要想取得更好的神經再生修復效果，往往需要人為干預。

周圍神經損傷后的神經再生是動態修復過程。激活神經元的內在生長能力并提供良好的再生微環境至關重要。激活并維持神經細胞的生物活性是早期修復神經損傷的重要前提。神經細胞在神經再生的過程中既可促進再生軸突生長，又可分泌大量的神經營養因子，為神經再生提供有效的微環境，從而促進周圍神經再生。有學者提出“神經再生室”微環境的概念，即神經損傷后的近、遠端以及間隙形成了具有促神經纖維再生的細胞、細胞外基質及神經營養物質等成分。在局部細胞成分中，增生的雪旺細胞可誘導神經再生，并為再生神經起到橋梁作用。基底膜內皮細胞有利于局部微血管的重建，從而盡早恢復神經再生和修復所依賴的血液循環。適量的巨噬細胞和成纖維細胞能促進局部損傷的修復和愈合。而隨神經營養因子的發現，更加豐富了人們對再生微環境的認識。神經營養因子可逆向運輸至神經元，起到維持神經營養的作用，并促進神經的修復和再生。然而，在周圍神經再生的過程中，內在神經營養因子有限，半衰期短且易受到再生微環境的影響而失去生物活性，因此提供外源性的神經營養因子是必要的。有研究表明：局部提供外源性的神經營養因子能夠保障再生軸突的幼芽到達遠側神經殘端所需要的營養，促進早期健康的髓鞘形成，并對神經功能的恢復起到重要作用。