[發(fā)明專利]一種藏紅花球莖玻璃化液氮低溫保存方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711113358.5
• 申請(qǐng)日: 2017-11-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109769800A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 唐文明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川海盛杰低溫科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N3/00
• 分類號(hào): A01N3/00
• 代理公司: 成都弘毅天承知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51230
• 代理人: 李小金;王正楠

本發(fā)明屬于植物組織保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種藏紅花球莖玻璃化液氮低溫保存方法。針對(duì)藏紅花球莖退化現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致種質(zhì)資源嚴(yán)重缺乏的問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：[1]種源準(zhǔn)備：選出生長(zhǎng)良好的球莖，將選出的球莖用清水洗凈，殺菌，在陰暗通風(fēng)處攤開(kāi)晾干；[2]預(yù)培養(yǎng)：將經(jīng)過(guò)步驟[1]處理的球莖接種到預(yù)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10天，培養(yǎng)溫度為26?30℃；[3]裝載：在室溫下用50％的玻璃化溶液處理經(jīng)步驟[2]培養(yǎng)后的球莖2?2.5小時(shí)；[4]脫水及凍存：脫水處理后，在0℃下用50％玻璃化溶液處理10分鐘，然后更換玻璃化溶液，放入液氮中保存。本發(fā)明適用于藏紅花的栽培。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物組織保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種藏紅花球莖玻璃化液氮低溫保存方法。

背景技術(shù)

超低溫保存是上世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)現(xiàn)代種質(zhì)資源離體保存技術(shù)。通常在液氮中保存，被保存材料細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)代謝和生長(zhǎng)活動(dòng)幾乎完全停止，處在相對(duì)穩(wěn)定的生物學(xué)狀態(tài)，達(dá)到長(zhǎng)期保存種質(zhì)的目的，超低溫保存是目前唯一不需要連續(xù)繼代的中長(zhǎng)期保存方式。玻璃化法超低溫保存是將細(xì)胞或組織置于由一定比例的滲透性和非滲透性保護(hù)劑組成的玻璃化溶液中，使材料及其玻璃化溶液在足夠快的降溫速率下固化成非結(jié)晶的玻璃化態(tài)，并以這種玻璃態(tài)在低溫下保存。玻璃化法因操作簡(jiǎn)單快捷，成本低，適宜保存種類廣泛，保存材料遺傳性穩(wěn)定，保存效果好等優(yōu)點(diǎn)，是近十年來(lái)用于優(yōu)良種質(zhì)資源中長(zhǎng)期保存的首選方法。

藏紅花別名番紅花、西紅花，是一種鳶尾科番紅花屬的多年生花卉，也是一種常見(jiàn)的香料。是西南亞原生種，最早由希臘人人工栽培。主要分布在歐洲、地中海及中亞等地，明朝時(shí)傳入中國(guó)，《本草綱目》將它列入藥物之類，目前在中國(guó)的江浙及華北等地都有栽培，是一種名貴的中藥材?？蓮钠渲^中提取香料和藏紅花甙、藏紅花苦甙和藏紅花醛等主要天然色素，藏紅花甙是對(duì)冠心病具有顯著療效的活性成分，臨床用于治療胸痹心痛、心絞痛，療效顯著，有效劑量小，安全性大，具有顯著的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，同時(shí)其柱頭在亞洲和歐洲作為藥用，有鎮(zhèn)靜、祛痰、解痙作用，用于胃病、調(diào)經(jīng)、麻疹、發(fā)熱、黃膽、肝脾腫大等的治療。

但是藏紅花只有柱頭可入藥，因適宜栽培的地區(qū)有限、條件苛刻等因素，產(chǎn)量極低，資源極其有限，致使其價(jià)格昂貴，一直被譽(yù)為“植物黃金”。由于藏紅花不能進(jìn)行有性生殖，只能通過(guò)球莖進(jìn)行無(wú)性繁殖，且栽培條件下其球莖退化現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致種質(zhì)資源嚴(yán)重缺乏。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述藏紅花球莖退化現(xiàn)象嚴(yán)重，導(dǎo)致種質(zhì)資源嚴(yán)重缺乏的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種藏紅花球莖玻璃化液氮低溫保存方法，其目的在于：可以長(zhǎng)期保存藏紅花的種質(zhì)，避免栽培過(guò)程中球莖退化導(dǎo)致無(wú)種質(zhì)資源可用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種藏紅花球莖玻璃化液氮低溫保存方法，其特征在于，包括如下步驟：

[1]種源準(zhǔn)備：選出生長(zhǎng)良好的球莖，將選出的球莖用清水洗凈，殺菌，在陰暗通風(fēng)處攤開(kāi)晾干；

[2]預(yù)培養(yǎng)：將經(jīng)過(guò)步驟[1]處理的球莖接種到預(yù)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)10天，培養(yǎng)溫度為26-30℃；

[3]裝載：在室溫下用50％的玻璃化溶液處理經(jīng)步驟[2]培養(yǎng)后的球莖2-2.5小時(shí)；

[4]脫水及凍存：脫水處理后，在0℃下用50％玻璃化溶液處理10分鐘，然后更換玻璃化溶液，放入液氮中保存。

采用該技術(shù)方案后，藏紅花球莖內(nèi)的植物組織都被玻璃化而冷凍保存在液氮中，酶和微生物的活性都降到最低。當(dāng)需要的時(shí)候，只需要進(jìn)行復(fù)蘇就能用來(lái)作為種質(zhì)繁殖新的藏紅花植株。

優(yōu)選的，步驟[1]選用的球莖為利用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)的無(wú)損傷的藏紅花球莖，所述球莖的重量≥5g。選擇合適的球莖可以保證復(fù)蘇后再進(jìn)行組織培養(yǎng)的發(fā)芽率。

優(yōu)選的，步驟[1]所述殺菌過(guò)程為用配制好的質(zhì)量百分比濃度為0.08％的高錳酸鉀殺菌溶液浸沒(méi)球莖25分鐘，然后清水洗去表面殘留殺菌液。