[發(fā)明專利]一種嬰幼兒配方奶粉中乳清蛋白含量的檢測方法及實(shí)現(xiàn)該方法的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711107033.6
• 申請日: 2017-11-10
• 公開（公告）號: CN108152385A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 房芳;吳亞君;孫珊珊;郝星凱;應(yīng)美蓉;陳啟
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州譜勝檢測科技有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 昆明潤勤同創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 53205
• 代理人: 付石健

本發(fā)明公開了一種嬰幼兒配方奶粉中乳清蛋白含量的檢測方法及實(shí)現(xiàn)該方法的試劑盒，所述方法包括以下步驟：(1)檢測樣品中總蛋白的含量；(2)檢測樣品中αs1?酪蛋白、αs2?酪蛋白、β?酪蛋白以及κ?酪蛋白四種酪蛋白的含量；(3)通過計(jì)算總蛋白與四種酪蛋白的含量的差值，該差值即乳清蛋白的含量。本發(fā)明通過測定出樣品中總蛋白與四種酪蛋白的含量的差值，即可準(zhǔn)確的得到乳清蛋白的含量，而且本發(fā)明中檢測樣品中所有的酪蛋白，不涉及到換算系數(shù)，檢測方法簡單方便，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以準(zhǔn)確檢測出配方奶粉中乳清蛋白的含量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種嬰幼兒配方奶粉中乳清蛋白含量的檢測方法及實(shí)現(xiàn)該方法的試劑盒。

背景技術(shù)

定量蛋白質(zhì)組學(xué)的目的是對復(fù)雜的混合體系中所有的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，并對蛋白質(zhì)的量及量的變化進(jìn)行準(zhǔn)確的測定，是當(dāng)前系統(tǒng)生物科學(xué)研究的重要內(nèi)容。近年來，由于質(zhì)譜技術(shù)和生物信息學(xué)的進(jìn)步，定量蛋白質(zhì)組學(xué)在分析蛋白質(zhì)組或亞蛋白質(zhì)組方面已取得了令人矚目的成就。

在種種成熟的蛋白質(zhì)定量分析技術(shù)中，應(yīng)用三重四極桿質(zhì)譜(triplequadrupole)，在選擇反應(yīng)監(jiān)控模式(selected reaction monitoring，SRM)中，對蛋白質(zhì)中特異肽進(jìn)行檢測，在完全酶解的情況下，特異肽的摩爾濃度與對應(yīng)蛋白質(zhì)的摩爾濃度相同，故可以通過其與蛋白質(zhì)分子量計(jì)算獲得蛋白質(zhì)的濃度。公開號為CN103616454A的專利文獻(xiàn)公開了一種定量檢測人β-酪蛋白含量的方法以及試劑盒，該方法中利用人β-酪蛋白酶解后所獲得的特異多肽序列，設(shè)計(jì)出同位素標(biāo)記的特異肽和同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)物的序列，并基于內(nèi)標(biāo)法對人β-酪蛋白進(jìn)行定量檢測。

乳中的蛋白質(zhì)分為乳清蛋白和酪蛋白兩大類，酪蛋白是奶酪中的主要蛋白質(zhì)，并且因此而得名。在酸性環(huán)境中(特別是pH4.6)，酪蛋白會(huì)凝結(jié)沉淀，而嬰幼兒的腸胃功能在尚未發(fā)育完全，在食用酪蛋白含量較高的牛奶后，會(huì)在胃酸的作用下凝結(jié)成塊，難以消化和排空，導(dǎo)致嬰幼兒出現(xiàn)胃脹、厭食等癥狀。乳清蛋白是奶酪制作的副產(chǎn)品，其中含有大量的活性蛋白質(zhì)，例如乳鐵蛋白、溶菌酶、免疫球蛋白等，這些蛋白質(zhì)具有殺菌、抗病毒的活性，能夠幫助嬰幼兒建立自身免疫系統(tǒng)。

在牛奶中酪蛋白和乳清蛋白的比例約為8:2。在母乳中該比例為4:6。因此，我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-嬰兒配方食品》(GB 10765-2010)中規(guī)定“乳基嬰兒配方食品中乳清蛋白含量應(yīng)≥60％”。我國的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-嬰幼兒配方食品和乳粉乳清蛋白的測定》(GB/T 5413.2-1997)中介紹了一種基于十二烷基環(huán)酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)的檢測方法。樣品用SDS-PAGE進(jìn)行分離后，對酪蛋白與乳清蛋白各譜帶的光密度進(jìn)行測定，從而求得酪蛋白與乳清蛋白的含量比率。該方法由于本身性能限制，只適宜作為定性方法和半定量方法，無法用于定量檢測，所以沒有能夠廣泛推廣使用。

在過去5年間，有部分團(tuán)隊(duì)擬采用胰蛋白酶酶解-同位素稀釋-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立檢測方法。《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)-嬰幼兒配方食品和乳粉中乳清蛋白的測定(征求意見稿)》(GB 5413.xx-201x)采用了該方法，以VGINYWLAHK和IDALNENK作為特異肽，分別檢測樣品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的含量，通過一個(gè)換算系數(shù)折算出乳清蛋白含量。雖然α-乳白蛋白和β-乳球蛋白占總?cè)榍宓鞍椎?5％左右，但是其比例隨著生產(chǎn)條件、加工工藝的不同而有較大改變。所以，難以通過α-乳白蛋白和β-乳球蛋白來準(zhǔn)確計(jì)算乳清蛋白含量。雖然可以通過增加被測乳清蛋白種類的方法來提高計(jì)算準(zhǔn)確率，但是該方法存在嚴(yán)重的缺陷，由于乳清蛋白中含有數(shù)百種乳清蛋白，將會(huì)極大增加實(shí)驗(yàn)的成本和復(fù)雜程度。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種嬰幼兒配方奶粉中乳清蛋白含量的檢測方法，可以準(zhǔn)確檢測出配方奶粉中乳清蛋白的含量。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種嬰幼兒配方奶粉中乳清蛋白含量的檢測方法，包括以下步驟：

(1)檢測樣品中總蛋白的含量；