[發(fā)明專利]一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711105474.2 | 申請日： | 2017-11-10 |
| 公開（公告）號： | CN107586775A | 公開（公告）日： | 2018-01-16 |
| 發(fā)明（設計）人： | 郝瑞杰;李敏;程愷雯;馬云;孫寧;汪書哲;鄭秋枝 | 申請（專利權）人： | 信陽師范學院 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 鄭州大通專利商標代理有限公司41111 | 代理人： | 陳勇 |
| 地址： | 464000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 脂肪 組織 提取 rna 方法 | ||
1.一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟1：取牛脂肪組織，在液氮環(huán)境中研磨至粉末狀，迅速轉移至預冷的離心管中；
步驟2：向步驟1的離心管中加入trizol，使用振蕩器振蕩5～20分鐘，然后裂解1小時，得裂解液，離心，去除上層脂肪層與底部不溶物，取中間紅色透明裂解液；
步驟3：在步驟2所得中間紅色透明裂解液中，緩慢加入氯仿，手動振蕩混勻，于冰上靜置5～20min，然后離心，取透明上清液；
步驟4：在步驟3所得透明上清液中，緩慢加入預冷的異丙醇，于冰上靜置5～20min，然后離心，棄上清液，得底部沉淀；
步驟5：在步驟4所得底部沉淀中，加入體積分數(shù)為75%的乙醇溶液，輕微振蕩，使底部沉淀懸浮，離心，棄上清液，得第一次底部沉淀，再次加入體積分數(shù)為75%的乙醇溶液，輕微振蕩，使底部沉淀懸浮，離心，棄上清液，得第二次底部沉淀；
步驟6：取步驟5所得第二次底部沉淀，使用濾紙吸干離心管內的液體，干燥7～10min，然后加入DEPC處理水溶解。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，所述研磨時間為7～13min。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，步驟2中所述裂解1小時過程中振蕩離心管。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，步驟1所述的牛脂肪組織的質量和步驟2所述的trizol的體積比為0.1～0.3:1～1.5。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，步驟2～步驟5所述的離心的轉速均為12000r/min ，離心的時間為10～15min，離心溫度為4℃。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，步驟3所述中間紅色透明裂解液與氯仿的體積比為3～4:1，冰上靜置時上下顛倒使分層消失。
7.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，步驟4所述透明上清液與異丙醇的體積比為1:1～1.3。
8.根據(jù)權利要求1所述的一種從牛脂肪組織中提取總RNA的方法，其特征在于，所述濾紙呈圓心角度為5～20°的扇形。
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