[發(fā)明專利]一種免清洗的細胞膜紅色熒光成像試劑及其制備方法和用途有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711094899.8 | 申請日： | 2017-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN107941575B | 公開（公告）日： | 2020-03-31 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳富根;賈浩然;祝雅璇 | 申請（專利權(quán)）人： | 東南大學(xué) |
| 主分類號： | G01N1/28 | 分類號： | G01N1/28;G01N1/30;G01N21/64 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標事務(wù)所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 鄭立發(fā) |
| 地址： | 210018 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 清洗 細胞膜 紅色 熒光 成像 試劑 及其 制備 方法 用途 | ||
本發(fā)明公開了一種免清洗的細胞膜紅色熒光成像試劑及其制備方法和用途。該細胞膜成像試劑由兩端分別修飾有膽固醇和吲哚菁染料的聚乙二醇高分子構(gòu)成。該成像試劑制備簡單、水溶性及生物相容性良好、成像快速且無需清洗操作。此外，該試劑還能夠?qū)崿F(xiàn)對斑馬魚胚胎表皮細胞的細胞膜的原位成像。該試劑將在細胞和生物活體層次的細胞膜成像方面發(fā)揮重要應(yīng)用。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種免清洗的細胞膜紅色熒光成像試劑及其制備方法和用途，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
細胞膜作為細胞和環(huán)境之間的關(guān)鍵邊界，為細胞提供一個相對穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境，同時對細胞與外界環(huán)境之間的物質(zhì)運輸、能量轉(zhuǎn)換和信息傳遞過程也起著至關(guān)重要的作用。細胞膜的狀態(tài)變化，可以反映細胞本身形貌和存活狀態(tài)的變化。例如，即將發(fā)生凋亡的細胞往往會在細胞膜上分泌許多凋亡小泡，而細胞壞死時細胞膜上則會產(chǎn)生直徑達數(shù)微米的大泡，并伴隨細胞腫脹變圓等現(xiàn)象。細胞膜成像技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一項重要研究手段，利用熒光染料對細胞膜進行標記和示蹤，可以揭示包括胞飲、胞吐、細胞分裂及凋亡在內(nèi)的許多重要的生物學(xué)過程。然而，目前大多數(shù)細胞膜熒光探針所實現(xiàn)的成像效果并不理想。首先，商品化的細胞膜成像試劑(如DiD、CellMask等)易被細胞內(nèi)吞，細胞膜成像時間相對較短，難以實現(xiàn)長時間范圍內(nèi)的觀測。其次，目前大多數(shù)細胞膜染料都是發(fā)綠色熒光的，而生物樣品在這一波段的自發(fā)熒光較強。這會導(dǎo)致信噪降低，并且容易對成像造成干擾。更重要的是，現(xiàn)有的細胞膜探針大多局限在體外的細胞膜成像應(yīng)用，而在體內(nèi)層面(如斑馬魚胚胎)的細胞膜成像應(yīng)用則很少見報道。這是因為絕大多數(shù)的細胞膜成像試劑需要經(jīng)過清洗操作，這在體外培養(yǎng)時是可行的，但在體內(nèi)成像觀察時清洗操作就無法實施，所以開發(fā)能夠免清洗的細胞膜成像試劑是實現(xiàn)體內(nèi)成像的關(guān)鍵。綜上所述，開發(fā)一種發(fā)紅色熒光、成像效果穩(wěn)定且能夠?qū)崿F(xiàn)體內(nèi)層面細胞膜成像的細胞膜熒光探針具有迫切的應(yīng)用需求。
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種免清洗的細胞膜紅色熒光探針。該探針具有良好的水溶性，能夠快速錨定到動物細胞的細胞膜上，并能夠在較長時間內(nèi)對細胞膜進行紅色熒光成像。此外，該探針還能夠?qū)崿F(xiàn)對斑馬魚胚胎表皮細胞的細胞膜原位熒光成像。
技術(shù)方案：為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了一種免清洗的細胞膜紅色熒光成像試劑，該成像試劑可通過聚乙二醇分子兩端分別化學(xué)修飾膽固醇分子和吲哚菁染料分子獲得。
優(yōu)選的，所述的吲哚菁染料分子為Cy5或Cy7。
優(yōu)選的，所述聚乙二醇的分子量為1000-10000。進一步優(yōu)選的，所述聚乙二醇的分子量為1800-2200。更進一步優(yōu)選的，所述聚乙二醇的分子量為2000。
進一步的，本發(fā)明還提供了一種制備用于免清洗細胞膜紅色熒光成像的方法，包括以下步驟：
取N-羥基琥珀酰亞胺酯-吲哚菁染料分子，溶于磷酸緩沖液中，并迅速與膽固醇-聚乙二醇-氨基分子混合，室溫下反應(yīng)，結(jié)束后，純化，冷凍干燥，即得。
更具體的制備方法如下：
步驟1、稱取N-羥基琥珀酰亞胺酯-吲哚菁染料分子，溶于pH＝7.4的磷酸緩沖液中，并迅速與膽固醇-聚乙二醇-氨基分子混合，室溫下反應(yīng)4小時以上，其中染料分子與膽固醇-聚乙二醇-氨基分子的摩爾比為(0.5-2.5)：1，優(yōu)選為1.5：1；
步驟2、反應(yīng)結(jié)束后，用預(yù)定截留分子量的透析袋在超純水中對反應(yīng)后溶液進行純化，然后冷凍干燥，在-20℃中冷凍保存，備用。
進一步的，本發(fā)明還提供了所述細胞膜紅色熒光成像試劑在細胞膜成像中的應(yīng)用，所述試劑能夠?qū)崿F(xiàn)對體外培養(yǎng)細胞或體內(nèi)細胞的細胞膜成像，例如實現(xiàn)對斑馬魚胚胎表皮細胞的細胞膜體內(nèi)原位成像。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于東南大學(xué)，未經(jīng)東南大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201711094899.8/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
