[發(fā)明專利]包含戈氏梭菌的衍生細(xì)菌菌株的組合物及其使用方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711093258.0
• 申請(qǐng)日: 2012-08-28
• 公開（公告）號(hào): CN108102945B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏明謙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東新創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/145
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11204
• 代理人: 王達(dá)佐;洪欣

本發(fā)明涉及無(wú)毒非致病性戈氏梭菌(Clostridium ghonii)的衍生細(xì)菌菌株，其能抑制一種或多種實(shí)體瘤的生長(zhǎng)、逆轉(zhuǎn)或破壞一種或多種實(shí)體瘤。本發(fā)明還涉及包含所述衍生細(xì)菌菌株的組合物，用于靶向?qū)嶓w瘤的溶解。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及無(wú)毒非致病性戈氏梭菌(Clostridium ghonii)的衍生細(xì)菌菌株，其能抑制一種或多種實(shí)體瘤的生長(zhǎng)、逆轉(zhuǎn)一種或多種實(shí)體瘤，或幾乎或完全破壞一種或多種實(shí)體瘤。本發(fā)明還涉及包含所述衍生細(xì)菌菌株的組合物，用于靶向?qū)嶓w瘤的溶解。

發(fā)明背景

癌癥的形成是一個(gè)包括一系列分子和結(jié)構(gòu)改變的多階段過(guò)程。實(shí)體瘤，如黑素瘤、肺癌、結(jié)腸癌、頭/頸癌、卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌以及前列腺癌等，占所有癌癥的90％。在晚期，發(fā)生大量血管生成、壞死和低氧，這是這些癌癥的所有標(biāo)志。與其存在相關(guān)聯(lián)，這些實(shí)體瘤形成具有中心區(qū)的多個(gè)區(qū)域，所述中心區(qū)具有高組織間壓力、低細(xì)胞外pH、腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性以及厭氧代謝(包括高葡萄糖濃度和乳酸鹽狀態(tài)的糖酵解)，而外周區(qū)域具有快速分裂的典型的癌細(xì)胞。

腫瘤中心環(huán)境對(duì)目前的化學(xué)療法和放射療法是不利的，因?yàn)橛捎谧玖拥难苄纬珊透呓M織間壓力，它們拒絕被動(dòng)擴(kuò)散的化療藥物。此外，氧自由基的缺乏也促進(jìn)化療和放療抗性并降低治療過(guò)程中DNA損傷。

當(dāng)在早期進(jìn)行診斷時(shí)，有效策略是首先選擇移除癌癥的療法，然后進(jìn)行放療和/或化療以預(yù)防復(fù)發(fā)。然而，由于在臨床環(huán)境中缺少具體癥狀，高達(dá)85％的實(shí)體瘤患者在有效的外科手術(shù)不再是選擇的晚期出現(xiàn)?；?放療或兩者的組合經(jīng)常用作緩解性治療，這不能提高這些患者的總體存活率。已經(jīng)在臨床前動(dòng)物中試驗(yàn)了抗體和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑形式的化學(xué)品/藥物，用于晚期癌癥的治療，但是它們不能滲透實(shí)體瘤，不能聚積成高濃度、不能有效到達(dá)足夠數(shù)量的癌細(xì)胞，并保持非癌基質(zhì)細(xì)胞、干細(xì)胞以及腫瘤組織結(jié)構(gòu)完整。此外，抗性的頻繁出現(xiàn)使得這些分子療法多數(shù)無(wú)效。

治療癌癥的基因療法，被認(rèn)為是比上述藥物療法更好的選擇。活病毒療法被視為用于治療晚期實(shí)體瘤的目前現(xiàn)有的最佳方法，但是其具有諸如通過(guò)腫瘤的傳播不良(Shayakhmetov et al.,2002)以及在靜脈內(nèi)送遞后被肝從循環(huán)中快速清除等缺點(diǎn)?？傊?，迄今為止，所有目前可用的減小實(shí)體瘤的抗癌療法都未能滿足有效治療晚期癌癥的需要。

當(dāng)腫瘤中心環(huán)境(又稱為微環(huán)境)對(duì)目前的化療、放療以及病毒療法不利時(shí)，這類環(huán)境可能為使用厭氧細(xì)菌及其固有的溶瘤特性的基于細(xì)菌的療法提供了獨(dú)特的機(jī)會(huì)。已經(jīng)研究了多種厭氧細(xì)菌，包括屬于梭菌屬(Clostridium)的菌株。天然地，梭菌具有兩種生長(zhǎng)狀態(tài)，一種是營(yíng)養(yǎng)桿菌(vegetative rod)，另一種是圓形芽孢。后者是梭菌的堅(jiān)硬保護(hù)性形式，其有助于它們存活度過(guò)困難時(shí)期。芽孢具有堅(jiān)硬的外被，包裹在細(xì)菌內(nèi)部的關(guān)鍵重要部分之外。另外，還有襯于包裹物內(nèi)部的膜層。堅(jiān)硬的外被和膜襯能使梭菌在不適合營(yíng)養(yǎng)桿菌的嚴(yán)峻環(huán)境中存活。當(dāng)諸如厭氧環(huán)境和更多的養(yǎng)分等生長(zhǎng)環(huán)境變充足時(shí)，芽孢會(huì)增加基因表達(dá)并促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)桿菌的再生長(zhǎng)。

已經(jīng)證明，嚴(yán)格的厭氧蛋白水解的諾威氏梭菌(Clostridium novyi)和索氏梭菌(C.sordellii)特異性靶向獨(dú)特的低氧/壞死的腫瘤內(nèi)部(參見圖8)，從而當(dāng)與血管破壞劑聯(lián)合時(shí)，在幾種癌癥中引起適度溶瘤作用。然而，這些菌株是致病性微生物，自然引起多種人類疾病，其中，它們對(duì)人類的固有毒性已經(jīng)導(dǎo)致了嚴(yán)重問(wèn)題。這些問(wèn)題是，(1)毒性水平太高，難以作為用于人類治療的適當(dāng)治療模型而被接受，以及(2)與致病性細(xì)菌用于人類相關(guān)的生物安全難以克服。此外，諾威氏梭菌和索氏梭菌的野生型菌株表現(xiàn)出快速的毒性，但較不顯著的溶瘤作用。