[發明專利]一種阿魏酸酯酶基因、基因工程菌株以及制備方法和用途

有效

• 申請號: 201711086961.9
• 申請日: 2017-11-07
• 公開（公告）號: CN108048473B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 呂紅;劉洋;周峻崗;余垚
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N9/18;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/645
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種阿魏酸酯酶基因，其特征在于，所述阿魏酸酯酶基因來源于中國牦牛瘤胃微生物，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，編碼如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

2.一種馬克斯克魯維酵母重組表達載體，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母重組表達載體由如權利要求1所述的阿魏酸酯酶基因克隆到馬克斯克魯維酵母表達載體中獲得。

3.一種馬克斯克魯維酵母基因工程菌株，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母基因工程菌株由如權利要求2所述的馬克斯克魯維酵母重組表達載體導入馬克斯克魯維酵母宿主細胞中，經篩選與鑒定獲得。

4.如權利要求3所述的馬克斯克魯維酵母基因工程菌株，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母表達載體不含有分泌信號肽或含有分泌信號肽。

5.如權利要求4所述的馬克斯克魯維酵母基因工程菌株，其特征在于，所述分泌信號肽為來源于馬克斯克魯維酵母自身的菊粉酶信號肽或來源于釀酒酵母的alpha信號肽。

6.如權利要求3或5所述的馬克斯克魯維酵母基因工程菌株，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母表達載體的DNA序列均來源于馬克斯克魯維酵母自身，不含有來源于大腸桿菌基因組上的DNA序列。

7.如權利要求3或5所述的馬克斯克魯維酵母基因工程菌株，其特征在于，所述馬克斯克魯維酵母基因工程菌株可通過分泌表達或胞內表達阿魏酸酯酶。

8.一種制備阿魏酸酯酶的方法，其特征在于，利用如權利要求3所述的馬克斯克魯維酵母基因工程菌株制備獲得阿魏酸酯酶；所述方法包括以下步驟：發酵時間48-72小時，發酵溫度30-35℃，發酵碳源至少包括葡萄糖和蔗糖中的一種，發酵氮源至少包括無機鹽和酵母抽提物中的一種。

9.如權利要求8所述的制備阿魏酸酯酶的方法，其特征在于，具體為：在5L的發酵罐中進行小試發酵，通過流加培養基的方法進行阿魏酸酯酶馬克斯克魯維酵母重組菌的高密度發酵；發酵培養基采用初始體積為1.6L，含2％的酵母粉，5％的葡萄糖；糖濃度1％時開始流加補料，N源的濃度與碳源的濃度按照5：1，并且控制葡萄糖濃度為1％，發酵周期持續48小時。

10.如權利要求8所述的方法制備的阿魏酸酯酶的用途，其特征在于，所述阿魏酸酯酶作用于天然原料制備阿魏酸，所述天然原料至少包括麥麩、玉米麩皮和玉米芯中的一種或其組合。

11.如權利要求8所述的方法制備的阿魏酸酯酶的用途，其特征在于，所述阿魏酸酯酶與纖維素酶和/或半纖維素酶聯合作用，提高含有纖維素或半纖維素物質的原料的降解率。

12.如權利要求8所述的方法制備的阿魏酸酯酶的用途，其特征在于，所述阿魏酸酯酶可應用于造紙、生物質材料降解和芳香類化合物的生物合成領域。

13.如權利要求8所述的方法制備的阿魏酸酯酶在制備飼料添加劑和/或食品添加劑中的用途。