[發明專利]單鏈環狀文庫的構建方法有效
| 申請號： | 201711078817.0 | 申請日： | 2017-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN109750086B | 公開（公告）日： | 2022-08-02 |
| 發明（設計）人： | 嚴海生;張通達;郭健 | 申請（專利權）人： | 深圳華大智造科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢 |
| 地址： | 518083 廣東省深圳*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鏈環 文庫 構建 方法 | ||
1.單鏈環狀文庫的構建方法，包括：
1）利用轉座酶復合體打斷靶DNA，得到DNA打斷產物；
所述轉座酶復合體包括轉座酶和轉座元件，所述轉座酶為TN5轉座酶，所述轉座元件由名稱分別為A和B的接頭組成；
所述A由名稱分別為a1和c1的單鏈DNA組成，所述a1由捕獲標簽、名稱序列甲的單鏈DNA和所述轉座酶的識別序列依次連接得到，所述序列甲為序列表中序列1的第1-16位所示的單鏈DNA，所述識別序列為序列1的第17-35位；所述c1為所述識別序列的互補序列；
所述B由所述識別序列所示單鏈DNA以及所述c1組成；
2）對所述DNA打斷產物進行缺口平移，得到缺口平移產物；將所述缺口平移產物解鏈，利用所述捕獲標簽進行捕獲得到含有所述捕獲標簽的單鏈DNA；所述捕獲標簽為生物素；
利用成套引物對所述含有所述捕獲標簽的單鏈DNA進行擴增，得到的擴增產物；所述成套引物由名稱分別為P1、P2和P3的單鏈DNA組成；
所述P1含有所述序列甲，所述序列甲位于所述P1的3′端，所述P1還含有標簽序列和/或用于對所述標簽序列進行測序的標簽測序引物和/或測序引物；所述標簽序列為隨機序列，所述標簽序列的長度為6-16nt ；
所述P2為所述P1的5′端的第1-15位；
所述P3為所述識別序列的3′端部分序列，所述P3的長度為6-19nt；
3）將所述擴增產物環化，得到單鏈環狀文庫。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述成套引物中所述P1、所述P2和所述P3的摩爾比為1:50:1-1:300:1。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述成套引物中所述P1、所述P2和所述P3的摩爾比為1:100:1-1:200:1。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述P1中所述標簽序列的長度為10nt。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述標簽測序引物為標簽測序引物1和標簽測序引物2；所述標簽測序引物1為序列表中序列2的第18-32位所示的單鏈DNA，所述標簽測序引物2為與序列表中序列2的第43-59位互補的單鏈DNA；
所述測序引物為測序引物1和測序引物2；所述測序引物1為序列表中序列2的第58-84位所示的單鏈DNA，所述測序引物2為與序列表中序列2的第1-25位互補的單鏈DNA。
6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述P1為序列表中序列2所示的單鏈DNA；
所述P2為序列表中序列3所示的單鏈DNA；
所述P3為序列表中序列4所示的單鏈DNA。
7.單鏈DNA前體文庫的制備方法，包括權利要求1-6中任一所述方法中的步驟1）和2）。
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