[發明專利]核苷酸序列、使用其提高蛋白表達效率的方法及應用

有效

• 申請號: 201711073035.8
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN109750036B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 田克恭;王瑩;孫進忠;張許科
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/12;A61K39/235;A61P31/14;A61P31/20;C12R1/19
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列為ggacctagcggaaaggag或ggacctagcggagaggaa所示。

2.一種重組表達載體，其中，所述重組表達載體起始密碼子之后、蛋白編碼序列之前為權利要求1所述的核苷酸序列，所述重組表達載體的出發載體為pET28質粒、pColdIII質粒或pCDFDuet質粒。

3.一種重組大腸桿菌，所述重組大腸桿菌含有權利要求2所述的重組表達載體。

4.一種使用權利要求2所述重組表達載體提高蛋白表達效率的方法，所述方法包括：

步驟（1）將含所述蛋白基因的所述重組表達載體轉化大腸桿菌；以及

步驟（2）表達所述蛋白。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述蛋白的表達為多蛋白的串聯共表達或融合表達。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述大腸桿菌為大腸桿菌BL21（DE3）。

7.根據權利要求4所述的方法，其中，所述步驟（1）中所述蛋白基因為雞傳染性法氏囊病毒VP2蛋白、禽腺病毒Penton蛋白、禽腺病毒Fiber-2蛋白、禽減蛋綜合征病毒Penton蛋白或禽減蛋綜合征病毒Fiber蛋白中的一種或多種。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述雞傳染性法氏囊病毒VP2蛋白為SEQID NO.4所示，所述禽腺病毒Penton蛋白為SEQ ID NO.5所示，所述禽腺病毒Fiber-2蛋白為SEQ ID NO.6所示，所述禽減蛋綜合征病毒Penton蛋白為SEQ ID NO.7所示，所述禽減蛋綜合征病毒Fiber蛋白為SEQ ID NO.8所示。

9.一種制備疫苗組合物的方法，其中，所述方法包括：

步驟（1）將權利要求7-8任一項所述方法表達的抗原蛋白使用非離子表面活性劑處理1次以除去內毒素；

步驟（2）將所述去除內毒素的抗原蛋白與佐劑混勻，得到所述疫苗組合物。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中非離子表面活性劑為Triton X-114。