[發(fā)明專利]應(yīng)用熒光實時定量PCR篩選重組漢遜酵母病毒樣顆粒表達株的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910303764.0 | 申請日： | 2019-04-16 |
| 公開（公告）號： | CN110093404A | 公開（公告）日： | 2019-08-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張建城;楊曉宇;于佳平 | 申請（專利權(quán)）人： | 艾美漢信疫苗（大連）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/04;C12R1/78 |
| 代理公司： | 大連非凡專利事務(wù)所 21220 | 代理人： | 閃紅霞 |
| 地址： | 116600 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 病毒樣顆粒 漢遜酵母 實時定量PCR 蛋白基因 特異性擴增 肌動蛋白 結(jié)構(gòu)基因 應(yīng)用熒光 總RNA 篩選 陽性克隆株 液體培養(yǎng)基 擴增循環(huán) 誘導(dǎo)表達 對數(shù)期 反轉(zhuǎn)錄 培養(yǎng)物 一步法 采樣 擴增 熒光 接種 | ||
【權(quán)利要求書】：
1.一種應(yīng)用熒光實時定量PCR篩選重組漢遜酵母病毒樣顆粒表達株的方法，其特征在于按照如下步驟進行：
a. 將構(gòu)建完成的重組漢遜酵母陽性克隆株接種至液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至對數(shù)期加入甲醇進行誘導(dǎo)表達24h，對培養(yǎng)物進行采樣并提取樣品總RNA；
b. 使用一步法熒光實時定量PCR對所提取的樣品總RNA進行反轉(zhuǎn)錄和特異性擴增，所述特異性擴增是擴增漢遜酵母肌動蛋白結(jié)構(gòu)基因及構(gòu)成病毒樣顆粒的N個組件蛋白基因；
c. 獲得各樣品漢遜酵母肌動蛋白結(jié)構(gòu)基因及病毒樣顆粒的N個組件蛋白基因的擴增循環(huán)數(shù)，分別記為及，所述n為1，2，3……N；
d. 按下式計算與差值比例，；取與差值較大且比例與N個組件蛋白基因構(gòu)成病毒樣顆粒的比例相近的樣品，即篩選出重組漢遜酵母病毒樣顆粒表達株。
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