[發明專利]一種快速測定魚肝油中EPA和DHA含量的方法

在審

• 申請號: 201711071517.X
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN108051506A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 王瓊芬;劉婷;鄭平安;徐虹;石婧
• 申請（專利權）人: 舟山市食品藥品檢驗檢測研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

本發明涉及一種魚肝油中ω?3不飽和脂肪酸EPA、DHA的測定方法，該方法采用柱前衍生對魚肝油中的EPA、DHA進行衍生化后，用氣相色譜法對其進行測定，按加校正因子內標法計算魚肝油中的EPA、DHA含量。本發明的方法包括下列步驟：1.魚肝油柱前衍生化反應制備脂肪酸甲酯溶液；2.EPA甲酯、DHA甲酯相對校正因子測定；3.EPA、DHA氣相色譜含量測定；4.按加校正因子內標法計算EPA和DHA的含量。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種快速測定魚肝油及其魚肝油軟膠囊中EPA和DHA的方法。

背景技術

魚肝油是從魚類肝臟提取出的主要含有維生素A、維生素D及各種脂肪酸等天然化合物的脂肪油，各國藥典均有收載。魚肝油中含有二十多種脂肪酸，其中EPA、DHA為其特有脂肪酸。EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)屬ω-3多不飽和脂肪酸，陸地上的動植物體內幾乎沒有，在魚類肝臟中含量最高，EPA、DHA是人體不可缺少的重要營養素，其生理活性作用眾所周知。目前國內魚肝油市場魚龍混雜，尤其是國產藥用級魚肝油產品質量堪憂，基本是人工合成的維生素A、D及植物油勾兌而成，基本不含有EPA和DHA，已經不再是魚肝油，實際是維生素AD制劑。故有必要建立一種快速、簡便、準確、可靠的魚肝油中EPA、DHA含量測定方法，以規范國內魚肝油市場。魚肝油中EPA、DHA含量測定國內外標準均未見收載，文獻報道的測定方法大多采用柱前衍生氣相色譜外標法，柱前衍生化方法比較復雜，甲酯化反應催化劑也大多使用14％三氟化硼甲醇溶液。三氟化硼為毒性試劑，腐蝕性強，且易燃易爆，遇水產生爆炸性分解，對實驗人員帶來較大的健康風險，對環境造成較大的危害，且價格昂貴。同時由于EPA、DHA提純工藝復雜，對照品價格昂貴，外標法測定大大增加了檢測成本。

發明內容

本發明的目的在于克服現有魚肝油檢測技術存在的諸多缺點，設計提出一種快速、簡便、環保檢測魚肝油中EPA、DHA的方法，以解決目前的檢測方法存在的操作繁瑣、對照品昂貴、檢測成本高、試劑毒性大以及定量測定結果準確度差等問題。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種快速測定魚肝油中EPA和DHA含量的方法，所述方法包括下列步驟：

(1)魚肝油柱前衍生化反應制備脂肪酸甲酯溶液，包括皂化反應、甲酯化反應、提取鹽析與脫水：

a.皂化反應：精密稱取供試品100mg置20mL帶螺口反應瓶中，加1.5mL氫氧化鈉甲醇溶液，漩渦混合30秒，于90℃中加熱20min，取出冷卻，得皂化反應溶液；

b.甲酯化反應:于皂化反應溶液中，加入2mL硫酸甲醇溶液，漩渦混合30秒，于100℃中加熱10min，取出冷卻，得甲酯化反應溶液；

c.提取鹽析：于甲酯化反應溶液中精密加入2mL濃度為5mg/mL二十三烷酸甲酯異辛烷溶液，漩渦混合1min，立即加5mL飽和氯化鈉溶液，振搖，靜置分層；

d.脫水處理：取上清液轉移至裝有無水硫酸鈉的試管中，振搖，使脫水，脫水后溶液即為脂肪酸甲酯溶液；

(2)EPA甲酯、DHA甲酯相對校正因子測定：

a.混合標準溶液制備：稱取二十三烷酸甲酯、EPA甲酯、DHA甲酯各50mg置10mL棕色容量瓶中，加異辛烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，得混合標準溶液，平行制備二份；

b.氣相色譜檢測；

(3)EPA、DHA含量測定：