[發明專利]一種絞股藍皂苷TN-1在制備抗肝癌藥物中的應用

在審

• 申請號: 201711071361.5
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107982272A
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 鄭志忠;明艷林;陳良華;黃雯;鄭國華
• 申請（專利權）人: 廈門華僑亞熱帶植物引種園
• 主分類號: A61K31/7032
• 分類號: A61K31/7032;A61P35/00;A61P1/16
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司35232
• 代理人: 賴慶梧

技術領域

本發明涉及絞股藍的技術領域，尤其涉及一種絞股藍皂苷TN-1在制備抗肝癌藥物中的應用。

背景技術

絞股藍(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino.)，又名七葉膽、五葉參、七葉參和甘蔓茶等，是一種葫蘆科絞股藍屬的多年生攀緣植物，系我國民間常用的一種中草藥，是現在所知僅有的含有人參皂苷類成分的非人參屬植物。據統計，目前全世界上的絞股藍品種共有17個種2個變種，其中中國有14個種2個變種，主要分布區域為東南亞等地以及我國秦嶺及長江以南地區。2002年3月5日，絞股藍被國家衛生部列入保健品名單，成為藥食兩用新資源。

絞股藍皂苷(Gypenoside，Gyp)是絞股藍中的一種主要活性成分，其中，Gyp XLVI是福建省南靖地區絞股藍地上部分的主要的絞股藍皂苷之一，而另一絞股藍皂苷，Gyp TN-1的含量則非常低。目前尚未見到有文獻對Gyp TN-1的生物活性進行詳細的報道。

有鑒于此，本發明人研究和設計了一種絞股藍皂苷TN-1在制備抗肝癌藥物中的應用，本案由此產生。

發明內容

本發明的目的在于提供一種絞股藍皂苷TN-1在制備抗肝癌藥物中的應用。

為了實現上述目的，本發明解決其技術問題所采取的技術方案是：

一種絞股藍皂苷TN-1在制備抗肝癌藥物中的應用。

所述絞股藍皂苷TN-1，名稱為(20S)-達瑪烷-24-烯-2α,3β,12β,20-四醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，為白色粉末，分子式為C₃₆H₆₂O₉，分子量為638.439結構式為：

所述絞股藍皂苷TN-1(Gyp TN-1)，可以通過酶法轉化絞股藍總皂苷的方法，逐步分離純化得到，其制備方法簡單、成本低。當然，所述絞股藍皂苷TN-1也可以從商業渠道獲得。

所述藥物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、混懸劑、糖漿劑、腸溶制劑、乳劑懸浮液和注射劑中的至少一種制劑形式。

本發明通過測定MTT法、集落形成試驗和AO/EB熒光染色測定Gyp TN-1的體外抗肝癌活性，結果表明，絞股藍皂苷TN-1對人肝癌細胞SMMC7721和Bel7402的生長具有顯著的抑制作用，對肝癌細胞SMMC7721和Bel7402的處理48h的IC₅₀分別為36.65±12.31μg/mL、53.42±5.83μg/mL，其IC₅₀值與比較公認的抗癌藥物人參皂苷IH901相近。由此可見，絞股藍皂苷TN-1可在制備抗肝癌藥物中應用，具有良好的開發應用前景。

所述絞股藍皂苷TN-1在制備抗肝癌藥物中的應用至今未見報道，由于其對于人肝癌細胞的抑制活性顯著，不存在由其他化合物給出任何啟示的可能，具備突出的實質性特點，同時用于肝癌的防治顯然具有顯著的進步。

附圖說明

圖1為本發明的絞股藍皂苷TN-1對不同細胞株處理48h的抑制曲線；

圖2為本發明絞股藍皂苷TN-1的集落形成數據統計圖；

圖3為本發明絞股藍皂苷TN-1的抑制肝癌細胞SMMC7721集落形成圖；

圖4為本發明絞股藍皂苷TN-1的抑制不同細胞株的AO/EB熒光染色圖。

具體實施方式

以下給出本發明制備方法的實施例，對本發明作進一步描述。本發明所選用的人正常肝細胞Chang Liver、肝癌細胞株SMMC7721、Bel7402均購自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫，為公開的生物材料。

實施例1實驗方法

1.1樣品和試劑的配制

樣品用甲醇配成濃度為50mg/mL的母液，經0.22μm膜過濾后，于4℃備用。

PBS緩沖液：137mmol/L NaCl，2.7mmol/L KCl，4.3mmol/L Na₂HPO₄，1.4mmol/L KH₂PO₄(pH 7.3)，121℃，40min高壓滅菌。

MTT溶液：稱取250mg MTT，加50mL的PBS緩沖液，攪拌30min，0.22μm濾膜過濾除菌后，分裝，4℃保存，兩周內有效。

1.2細胞培養