[發明專利]檢測PCM1-JAK2相對表達量的方法、試劑盒和寡核苷酸

有效

• 申請號: 201711071291.3
• 申請日: 2017-11-03
• 公開（公告）號: CN107815494B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 劉趙玲;吳鵬飛;王淑一
• 申請（專利權）人: 合肥艾迪康醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

檢測PCM1?JAK2相對表達量的方法、試劑盒和寡核苷酸，本發明提供定量檢測樣本中PCM1?JAK2融合基因相對表達量的方法、試劑盒和寡核苷酸，均涉及檢測用上游引物PCM1?JAK2?E36/E9?F、PCM1?JAK2?E25/E9?F，下游引物PCM1?JAK2?E36/E9?R、PCM1?JAK2?E36/E7?R、PCM1?JAK2?E25/E9?R，探針PCM1?E36?Probe和PCM1?E25?Probe以及內參基因Abl上游引物Abl?F、下游引物Abl?R和探針Abl?Probe。本發明有助于在臨床上檢測骨髓增生性異常/骨髓增殖性腫瘤患者體內PCM1?JAK2融合基因相對表達量，對于調整治療方案、評價治療效果、預測預后、預防臨床復發都具有重要意義。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，涉及一種定量檢測人類骨髓增生性異常/骨髓增殖性腫瘤樣本中的PCM1-JAK2融合基因相對表達量的方法和試劑盒及其所使用的寡核苷酸，通過采用實時熒光定量PCR技術，能夠對樣本中的PCM1-JAK2相對表達量進行定量檢測。

背景技術

骨髓增生性異常/骨髓增殖性腫瘤(MDS/MPN)是一類以一系或多系髓系細胞(包括紅系、粒系和巨核系)增殖為主要特征的克隆性造血干細胞疾病。大約有四分之三的MDS/MPN病例被稱為典型的骨髓增殖性腫瘤(MPN)，帶有JAK2基因上的V617F體細胞突變。這種突變可誘發血小板生成素受體(TPOR)、粒細胞集落刺激因子受體(G-CSFR)等活化及信號傳導異常，造成巨核細胞系及粒系祖細胞異常增殖，原發性血小板增多癥(PT)及原發性骨髓纖維化(PMF)的發病也可能與此有關。

JAK2基因編碼JAK-STAT通路中的酪氨酸激酶受體。人體內的JAK2基因發生V617F突變，可引起JAK2激酶及下游信號轉導通路的持續活化和增強，導致細胞惡性增殖和凋亡抑制，最終引起真性紅細胞增多癥(PV)的發生。JAK2突變已經被作為原發性紅細胞增多癥(ET)、許多PMF和PT病例的潛在分子機制。PCM1蛋白最初是作為自體抗原在病人中發現，病人表現為系統性硬化，并且表現出明顯的與中心粒復合體相關聯的細胞周期依賴性。PCM1蛋白包含幾個螺旋卷曲基序，這些基序被認為是用于促進特殊蛋白形成中心體、微管結構和在細胞周期進程中發生寡聚化。不同的斷裂點能檢在JAK2和PCM1t(8；9)(p21-23；p23-24)融合基因中檢測到，大多數PCM1-JAK2融合基因是符合讀碼框的，其編碼的融合蛋白在257～310KDa之間。這些融合蛋白包含PCM1的螺旋卷曲區域(96％來自PCM1)和JAK2的完整的酪氨酸激酶激活域(多達61％來自JAK2)。

對個別病例進行深入分析表明，PCM1-JAK2融合基因相關的異常的表型基因多效性與JAK2SH2樣結構域中的精確的斷裂點有關。文獻報道指出，Andreas Reiter等發現PCM1外顯子36分別與JAK2外顯子7、外顯子9發生融合的PCM1-JAK2剪接體，A Murati等發現了JAK2外顯子9與PCM1外顯子25發生融合的PCM1-JAK2剪接體。PCM1-JAK2融合基因是涉及JAK2的第三種融合基因，另外兩種為ETV6-JAK2和TEL-JAK2。研究發現在PCM1-JAK2相關疾病中，男性患者占絕大多數，男女患病比例為7:1，臨床癥狀經常包括肝脾腫大。大多數病例還有骨髓增生性腫瘤(MPN)或者骨髓增生異常綜合征(MDS)。PCM1-JAK2相關疾病可能演化為繼發性急性髓細胞白血病(AML)和B細胞型急性淋巴細胞白血病。

目前臨床上已經將PCM1-JAK2融合基因作為一種骨髓增生性異常/骨髓增殖性腫瘤個體化治療方案的選擇和制定依據。PCM1-JAK2融合基因檢測的常用技術有熒光原位雜交技術(FISH)、實時熒光定量PCR(RQ-PCR)等方法。FISH檢測結果較為直觀，但是試驗過程繁瑣，涉及試劑種類繁多，費時費力，且結果需經驗豐富的專業人士來判讀，結果判讀存在較大的主觀性。