[發明專利]評價抗生素植物毒性的方法

有效

• 申請號: 201711065749.4
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107860877B
• 公開（公告）日: 2020-06-02
• 發明（設計）人: 羅淵;梁婕;曾光明;李曉東;蔣龍波;武海鵬;方意龍;葉淑靜
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: G01N33/15
• 分類號: G01N33/15;G01N33/00
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 何文紅

本發明公開了一種評價抗生素植物毒性的方法，包括以下步驟：將蔬菜種子播種在含有抗生素的半固體培養基中進行培養；根據培養過程中蔬菜種子的發芽情況，獲取蔬菜種子的半數種子發芽時間T50、發芽數、發芽數概率分布、胚根長度，以它們作為參數評價抗生素的植物毒性。本發明方法利用蔬菜種子對抗生素的敏感性，通過蔬菜種子的發芽實驗評價抗生素的植物毒性，其中以蔬菜種子的半數種子發芽時間T50、發芽數、發芽數概率分布、胚根長度為參數，能夠有效地評價不同濃度抗生素的植物毒性，具有試驗周期短、操作簡單等優點。

技術領域

本發明屬于污染物毒性評價技術領域，涉及一種評價抗生素毒性的方法，具體涉及一種利用蔬菜種子發芽實驗評價抗生素植物毒性的方法。

背景技術

抗生素通過使用進入環境后，作為一種新興的污染物引起了人們的廣泛關注。尤其在養殖行業，抗生素長期以低劑量添加在飼料中用于動物疾病的預防，且抗生素大部分以原藥的形式被動物排出體外，通過多種途徑進入到土壤和水體中。因此，抗生素作為一種偽持久性污染物，以低濃度在環境中長期存在。當前，以植物實驗進行對抗生素生態毒理的研究，是對微生物和動物實驗評價抗生素潛在風險的重要補充。而以往的研究大多集中在對植物光合作用階段影響的研究方面，缺乏對植物早期生長階段影響的研究，即對植物種子發芽階段的研究。與植物光合作用階段相比，種子發芽階段作為植物早期生長的關鍵階段，具有對污染物敏感及生長周期短等特點。此外，目前國內外缺乏對種子發芽實驗評價毒性相關方法和指標的研究以及對污染物敏感種子的研究。

發明內容

本發明需要解決的技術問題的是克服現有技術的不足，提供一種試驗周期短、操作簡單的評價抗生素植物毒性的方法，該方法能夠有效地評價不同濃度抗生素的植物毒性。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：

一種評價抗生素植物毒性的方法，包括以下步驟：

S1、將蔬菜種子播種在含有抗生素的半固體培養基中進行培養；

S2、根據步驟S1培養過程中蔬菜種子的發芽情況，獲取蔬菜種子的半數種子發芽時間T50、發芽數、發芽數概率分布、胚根長度；

S3、以步驟S2獲得的半數種子發芽時間T50、發芽數、發芽數概率分布、胚根長度為參數評價抗生素的植物毒性。

上述的方法，進一步改進的，步驟S1中，所述含有抗生素的半固體培養基的制備方法包括以下步驟：

(1)配制鹽溶液，其中NaCl的濃度≤50mM，NH₄Cl的濃度≤0.4mM，pH為4.7；

(2)將步驟(1)中得到的鹽溶液與瓊脂混合，加熱，使瓊脂溶解，得到含有瓊脂的鹽溶液；

(3)將步驟(2)中得到的含有瓊脂的鹽溶液與等體積的抗生素溶液混合，冷卻凝固，得到含有抗生素的半固體培養基；所述抗生素溶液中抗生素的濃度是所述含有抗生素的半固體培養基中抗生素的濃度的兩倍。

上述的方法，進一步改進的，所述含有抗生素的半固體培養基中抗生素的濃度≥0.01μM，NaCl的濃度≤25mM，NH₄Cl的濃度≤0.2mM，pH為5.0；所述含有抗生素的半固體培養基中瓊脂的質量體積比為0.6％～0.8％。

上述的方法，進一步改進的，所述抗生素為水溶性抗生素；所述水溶性抗生素為鹽酸四環素。

上述的方法，進一步改進的，步驟S1中，所述培養在無光照條件下進行；所述培養的溫度為25℃～27℃；所述培養的時間為48h～52h。

上述的方法，進一步改進的，所述培養過程中每隔12h補加1mL～2mL含有抗生素的鹽溶液；所述含有抗生素的鹽溶液中抗生素的濃度、NaCl的濃度、NH₄Cl的濃度、pH均與所述步驟S1中的含有抗生素的半固體培養基相同。