[發(fā)明專利]食品中麩質(zhì)過敏原的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201711064939.4
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107860918A
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發(fā)明（設計）人: 唐恒立;周祚琴;趙亮;杰森M.羅博特姆;肯尼斯H.魯;亨利格賴斯;張部昌;唐小迪;王敏娜
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽大學;貝若凡生物科技（合肥）有限公司
• 主分類號: G01N33/559
• 分類號: G01N33/559
• 代理公司: 安徽合肥華信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司34112
• 代理人: 余成俊

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于食品安全檢測技術(shù)領域，具體涉及一種檢測食品中麩質(zhì)過敏原的膠體金免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術(shù)

小麥粉及麩質(zhì)蛋白因其耐熱性和諸如質(zhì)地、縮水性和芳香等方面的特性被極為普遍地用作食品原材料。麩質(zhì)蛋白是醇溶谷蛋白和麥谷蛋白的混合物，存在于小麥、黑麥和大麥中。

乳糜瀉是因?qū)熧|(zhì)蛋白的不耐性而導致的常發(fā)性疾病，若避免食用麩質(zhì)蛋白，則該病自消。在食品法典中“無麩質(zhì)”食品的定義是，食品中含有不超過200 ppm 的麩質(zhì)蛋白。籌備中的新食品標準則將定義天然“無麩質(zhì)”食品為含有不超過20 ppm的麩質(zhì)蛋白的天然食品，而“無麩質(zhì)”加工食品為含有不超過200 ppm 的麩質(zhì)蛋白的固化加工食品。許多國家也已經(jīng)執(zhí)行了更為嚴格的限量標準。

為避開食品過敏引起的不良反應，享受更加健康的生活，設計快速檢測試紙條已成為大眾需求，應用在生產(chǎn)原料、生產(chǎn)品質(zhì)管控、食品生產(chǎn)特定步驟快速采樣檢驗中，快速檢測試紙條的檢測過程僅需15分鐘，操作簡單，快速，可以即時確認檢測結(jié)果，肉眼即可判定結(jié)果，實現(xiàn)低成本、高效率、高專一性、高敏感度的對過敏物質(zhì)的快速檢驗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于研制一種能快速且無害的檢測食品中的麩質(zhì)過敏原試紙條，不僅能檢驗出食品中微量的過敏原蛋白，也可運用于食品加工過程的質(zhì)量管控，如進料、生產(chǎn)過程及成品檢測，提前預防不必要的過敏困擾。

本發(fā)明是基于一對能夠檢測麩質(zhì)蛋白的相互配對的單克隆配對抗體，這對單克隆配對抗體由美國BioFront公司提供，通過制備40nm膠體金，標記純化后的抗體，優(yōu)化各項層析條件等完成了該試紙條發(fā)明。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

食品中麩質(zhì)過敏原的膠體金免疫層析試紙條，包括依次組裝的吸水墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊，所述的金標墊上固定一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體-膠體金標記物，所述的硝酸纖維素膜上依次包被有與膠體金標記的抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體配對的另一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體檢測線、抗原線和羊抗鼠IgG質(zhì)控線。

所述的食品中麩質(zhì)過敏原的膠體金免疫層析試紙條還包括承載吸水墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊的底板。

所述的吸水墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊之間相互交疊連接。

所述的一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體-膠體金標記物中單克隆抗體的濃度為2-30μg/mL。

所述的檢測線中另一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體的濃度為0.5-3.0mg /mL。

所述的抗原線是由pH為5.0-7.0，濃度為0.01-0.2 mol/L的含有麩質(zhì)蛋白的 CPBS溶液作為包被液劃膜得到，其中麩質(zhì)蛋白的濃度為500-5000ppm。

所述的質(zhì)控線中羊抗鼠IgG的濃度為0.5-3.0mg/mL。

所述的食品中麩質(zhì)過敏原的膠體金免疫層析試紙條的制備方法，包括以下步驟：

（1）將抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體中的一種作為標記抗體，與膠體金按照（0.02-0.30）：1的體積配比混勻，經(jīng)純化、濃縮后得一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體-膠體金標記物；

（2）將步驟（1）制備的膠體金標記物噴涂固定到金標墊上，在硝酸纖維素膜上包被檢測線、抗原線、質(zhì)控線，處理完畢后用37-65℃干燥1-24h，放入防潮柜中儲存?zhèn)溆茫?/p>

（3）試紙條的組裝：

將吸水墊、硝酸纖維素膜、金標墊、樣品墊依次連接組裝或承載在底板上，即得所述的用于檢測食品中麩質(zhì)過敏原膠體金免疫層析紙條。

本發(fā)明的檢測原理為：將一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體標記到膠體金納米顆粒上成為本發(fā)明的金標抗體，使其能夠捕獲麩質(zhì)過敏原蛋白。在硝酸纖維素膜上固定另外一種抗麩質(zhì)蛋白單克隆抗體作為檢測線，同時固定合適的質(zhì)控抗體作為質(zhì)控線。當樣品滴加至樣品墊時，樣品會利用膜上微孔的毛細管作用在層析條上做橫向泳動。當樣品中含有麩質(zhì)待檢測物質(zhì)時，麩質(zhì)待測物會與金標抗體結(jié)合形成復合物，并與檢測線上的捕獲蛋白結(jié)合而被截獲，復合物中的膠體金聚集形成肉眼可見的紅色線條（T線），故會出現(xiàn)TC兩條線；如果金標抗體沒有完全被捕獲，會在抗原線結(jié)合，形成H線，故會出現(xiàn)THC三條線；如果待測物濃度太高，金標抗體都已經(jīng)跟待測物結(jié)合，故沒有多余的金標抗體被T線捕獲，故會出現(xiàn)C線一條線。當樣品中不含待檢測物質(zhì)時，未與待測物結(jié)合的金標抗體會被抗原線捕獲，膠體金聚集形成明顯的紅色線條（H線），故會出現(xiàn)HC兩條線。因此，可以根據(jù)試紙條上檢測線和質(zhì)控線的顯色情況判斷樣品中是否含有待測物以及試紙條是否失效。