[發(fā)明專利]一種雌酚類半抗原、完全抗原及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711063768.3
• 申請日: 2017-11-02
• 公開（公告）號: CN107698441B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈敏
• 申請（專利權(quán)）人: 山東師范大學(xué)
• 主分類號: C07C51/367
• 分類號: C07C51/367;C07C59/70;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;G01N33/74;G01N33/535
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 王志坤

本發(fā)明公開了一種雌酚類半抗原、完全抗原及其制備方法。所述方法包括：將雌酚類和一氯乙酸鹽在常溫、催化劑存在的條件下，于有機溶劑中進行反應(yīng)，冰水終止反應(yīng)，有機萃取劑未反應(yīng)的雌酚類，水相用酸酸化，生成白色沉淀，即得雌酚類半抗原。該方法通過對合成中催化劑和反應(yīng)時間等的優(yōu)化，提供一種無需加熱和控制pH的簡便方法，短時間內(nèi)即可獲得半抗原；利用產(chǎn)物和底物溶解特性不同，利用萃取方法除去未反應(yīng)的雌酚類物質(zhì)，同時所得雌酚類物質(zhì)通過回收，可繼續(xù)使用，節(jié)約反應(yīng)底物；最后通過鹽酸酸化的方法結(jié)晶的方法，即可獲得高純度的雌酚類半抗原；利用雌酚類半抗原與載體蛋白連接獲得完全抗原。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫化學(xué)和檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種雌酚類半抗原、完全抗原及其制備方法，尤其是涉及己烯雌酚(DES)、己烷雌酚(HEX)和雙烯雌酚(DIS)半抗原的制備方法。

背景技術(shù)

環(huán)境雌激素指具有雌激素效應(yīng)，能夠模擬天然雌激素，干擾內(nèi)分泌功能的一類化合物。己烯雌酚(DES)、己烷雌酚(HEX)和雙烯雌酚(DIS)，是非甾體同化激素，可促進動物體內(nèi)氮停留增加，具有增加蛋白質(zhì)沉積和減少脂肪沉積的作用，因其結(jié)構(gòu)簡單、易于合成、成本低等特點，而被應(yīng)用于促進畜禽生長、增加瘦肉率等。由于DES、HEX、DIS等均屬于環(huán)境雌激素，可通過干擾或阻斷雌激素受體與內(nèi)源性雌激素的相互作用，影響天然激素的合成、分泌、運輸、反應(yīng)和代謝等，從而導(dǎo)致生殖、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)等的異常。當其在體內(nèi)蓄積到一定程度，會破壞機體的正常生理平衡，因此國家陸續(xù)出臺一系列禁令，禁止限制這些環(huán)境雌激素的使用。2002年農(nóng)業(yè)部公布的《食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單》中，禁止DES作為獸藥使用。國家制定了嚴格的標準，以保障食品安全，消除潛在的食品安全隱患。

目前常用的DES、HEX、DIS殘留檢測方法主要有紫外分光光度法、熒光法、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法及酶聯(lián)免疫法等。其中紫外分光光度法檢測靈敏度相對較低，色譜法和熒光法靈敏度較高，色譜法和熒光法的檢出限可達到μg/L以下，但是色譜法不能鑒定出分析物的結(jié)構(gòu)，往往還需要與質(zhì)譜聯(lián)用的手段確認結(jié)構(gòu)，該方法的樣品前處理繁瑣，消耗大量溶劑，且依賴于大型儀器和專業(yè)技術(shù)檢測人員。酶聯(lián)免疫檢測方法檢測限可達到0.1μg/L以下，具有簡單、快速、特異性好、分析容量大、成本低的優(yōu)點，可以大大簡化甚至省去前處理過程，不需要大型儀器，對使用人員的專門技術(shù)要求不高，容易普及和推廣。建立酶聯(lián)免疫法，首先必須制備出效價高特異性強的抗體。由于許多目標物為小分子，無法引起免疫活性，需要制備半抗原合成完全抗原，同時由于目標物所具有的官能團不同，因此半抗原的設(shè)計和合成是完全抗原的關(guān)鍵步驟，決定最終得到抗體表面的抗原決定簇的特性。

DES、HEX、DIS等均為小分子化合物質(zhì)，本身不具有導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體的能力，因此需要進行半抗原的制備。在構(gòu)建半抗原時可考慮在不同的位點引進活性功能團：1、在兩個酚羥基中間的烴基部位接上一個連接臂；2、酚羥基接上一個連接臂。對于在烴基部位引入活性基團而言，DES和DIS的烴基部位有特異性的雙鍵結(jié)構(gòu)，在烴基部位制備半抗原，可能會使其雙鍵結(jié)構(gòu)被破壞，從而導(dǎo)致制得的抗體特異性不高。對于HEX而言，烴基部位不易被活化，在烴基部位接上連接臂相對困難。而對于在酚羥基上引進活性功能團，在其酚羥基一端接上一個帶有氨基或羧基的連接臂相對較易，同時所制備的半抗原可以保留其中特異性的烴基結(jié)構(gòu)，制備得到的抗體特異性較好。

現(xiàn)有技術(shù)對于酚羥基上引進活性功能團，一般有兩種方式，一種是與酚羥基形成酯鍵，一種是與酚羥基形成醚鍵。由于動物體內(nèi)存在酯酶，酯鍵連接方式在動物體內(nèi)不穩(wěn)定，其免疫原性大大降低，因此采用醚鍵連接方式可使形成的完全抗原在動物體內(nèi)不易降解，因此醚鍵連接的半抗原的應(yīng)具有更廣泛的應(yīng)用。