[發明專利]一株防治白術根腐病的菌株BZJN1及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711063271.1
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107881128B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 游景茂;穆森;熊坤;谷勇;李娟;曹凡;鄒莊玲;郭杰;林先明;郭曉亮;段媛媛;向國耀;艾倫強;鄒宗成
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院中藥材研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發明公開了一株防治白術根腐病的菌株BZJN1，該菌株為枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)，其16SrDNA在NCBI的登錄號為MF357899；于2017年9月20日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCC M 2017518。本發明的生防細菌BZJN1來源于白術體內，和白術自身循環系統具有良好的兼容性；菌劑制作簡單且成本低，無毒、無害、及無環境污染，有利于安全有效的控制白術根腐病，促進白術生長，提高其產量和品質，同時有利于白術的綠色栽培，保護農田生態系統，實施白術產業的可持續發展。該菌劑有利于改良白術種植土壤，增加土壤中的微生物多樣性。

技術領域

本發明涉及菌株領域，具體涉及一株防治白術根腐病的菌株BZJN1及其制備方法和應用。

背景技術

白術(Atractylodes macrocephala)屬于菊科、蒼術屬多年生草本植物，具有健脾益氣，燥濕利水等功效，有重要的藥用價值，是多種處方的原料藥。目前白術畝產值約5000元，純利潤可達3000元，白術產業對于穩步推進貧困山區經濟發展、社會穩定有重大的作用和意義。白術根腐病一直困擾白術產業的進一步壯大和發展。白術根腐病廣泛分布于湖南、湖北、貴州、重慶等白術出產區，集中發生在5-8月，染病后根部變褐，后期黑色，腐爛，最終植株徹底死亡，根腐病導致白術平均減產15％以上，有些田塊的損失超過40％，最高發病率達到70-90％，該病具有很強的傳染性，可伴隨農事操作、雨水、染病種根等方式傳染。游景茂通過試驗證明造成白術根腐病的主要致病菌為角擔菌(Ceratobasidium sp.)，這是在國內首次報道該致病菌可以導致白術根腐病。目前針對白術角擔菌防治的研究較少，國內外鮮有報道。因為缺乏有效的防治措施和科學的指導，白術種植戶濫用亂用各種化學藥劑，一方面增加了病原菌的抗藥性，殺滅大量有益微生物，同時增加了白術農藥殘留，污染了土壤、水等生態環境。因此利用生物防治的方法防治白術根腐病具有很好的推廣價值和生態效益。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一株防治白術根腐病的菌株BZJN1及其制備方法和應用。

為實現上述目的，發明人從健康的白術莖內分離得到一株防治白術根腐病的菌株BZJN1，通過鑒定證明其為枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)，其16S rRNA在NCBI的登錄號為MF357899，于2017年9月20日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCC M2017518。；地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號武漢大學校內。本發明的菌株BZJN1為需氧菌，單個菌體直徑為0.5～0.7×2～3微米。無莢膜，周生鞭毛。革蘭氏陽性，芽孢0.7～0.9×1.1～1.4微米，橢圓型。菌落表面粗糙不透明，白色或微黃色，在馬鈴薯葡萄糖液體培養基中搖菌培養72h后呈微黃色。

所述菌株BZJN1的16SrDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明還提供了上述一株防治白術根腐病的菌株BZJN1的制備方法，包括如下步驟：

S1、將內生細菌BZJN1用接種環取一環后涂布于PDA培養基上，30℃培養72h；

S2、將步驟1活化好的BZJN1單菌落移入100ml PDB液體培養基的250ml錐形瓶中，200轉/min、28℃下培養72h，獲得發酵種子液；

S3、將步驟2中發酵種子液接種量按照1∶150(V∶V)的比例接種于含有100ml PDB的錐形瓶，然后置于振蕩器中，30℃，200轉/min，發酵72小時，保證活菌體濃度達到1×10¹¹CFU/ml以上即可。

其中，所述步驟S1中PDA固體培養基通過以下步驟制備所得：取馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂10g混合攪拌均勻后，補充蒸餾水至1000ml，調節pH至7.0，在121℃高壓蒸汽滅菌30min，即得。