[發明專利]一種檢測ALL相關基因群的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711053097.2
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN108251525A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 汝昆;藺亞妮;賈玉嬌
• 申請（專利權）人: 天津協和華美醫學診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙) 12219
• 代理人: 張勇

本發明公開了一組用來篩查ALL相關基因突變的測序試劑盒以及后續的醫學解讀數據庫。ALL相關基因群包括FAT1，KRAS等16個基因。測序試劑盒包括對ALL相關16個基因全部外顯子進行擴增的多重PCR引物。本發明提供的篩查ALL基因突變的試劑盒具有檢測效率高、突變基因覆蓋面廣、檢出率高等優點；給出的醫學解讀報告具有準確、權威的特點。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，進一步涉及篩查ALL相關基因突變的檢測試劑盒及其醫學解讀數據庫，具體涉及一種檢測ALL相關基因群的檢測試劑盒。

背景技術

ALL(acute lymphoblastic leukemia即急性淋巴細胞白血病)是一種起源于單個B或T淋巴細胞前體細胞的惡性腫瘤。骨髓內原始細胞的增殖和聚積導致正常造血受抑，從而發生貧血、血小板減少和中性粒細胞減少。ALL可根據免疫學、細胞遺傳學和分子遺傳學分為多種亞型。ALL的年發生率約是每10萬人中有1.6人，男性比女性略多，占所有白血病比例接近12％。該病最常見于兒童，但是任何年齡均可發生。目前導致ALL的確切發病機制尚未明確，但一般認為遺傳、輻射、化學物質(如苯)、藥物及其他職業上的暴露(如濃煙、顏料、殺蟲劑等)可能與ALL的發生有關。

目前檢測ALL的方法主要涉及細胞形態、流式細胞學、細胞遺傳學、分子生物學。其中分子生物學的實驗方法主要有巢式PCR、一代測序等。PCR方法不能直觀的得到具體的突變序列，而一代測序的方法受到測序通量的影響，無法一次性檢測多個基因的全部外顯子區域。而二代測序作為一種高通量的檢測方法，可以一次性準確測量多個基因的外顯子序列，使精準治療成為可能。

發明內容

本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種檢測ALL相關基因群的檢測試劑盒，以解決現有技術中ALL的診斷方法較為局限，缺乏從分子生物學的角度診斷ALL的依據的技術問題。

本發明要解決的另一技術問題是現有技術的ALL診斷方法準確性較低。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測ALL相關基因群的檢測試劑盒，該試劑盒包括以下16個基因： ASXL1，CREBBP，EP300，FAT1，FBXW7，FLT3，JAK1，JAK2，JAK3，KRAS， NOTCH1，NRAS，PTPN11，RUNX1，TET2，TP53。

上述16個基因由121個熱點突變組成，其突變位點為本領域常規的突變位點，較佳地包括了indel突變位點(插入或缺失引起的序列改變insertion or deletion， indel)、無義突變位點、拼接區突變位點或錯義突變位點，更佳地本發明所述的 16個基因外顯子區域的熱點突變如表1所示。

表1熱點突變列表

本發明所述的16個基因外顯子區域的熱點突變可用于對ALL做出輔助診斷，本領域ALL常規的診斷方法有形態學、細胞遺傳學和流式細胞學，本發明所述方法較佳地從分子生物學角度對ALL做出診斷。

本發明提供一組檢測本發明所述ALL相關基因外顯子區域的多重PCR引物，所述引物的擴增范圍包括16個與ALL相關基因的外顯子區域，擴增得到的單個片段長度為250bp左右。利用本發明提供的多重PCR引物，結合二代測序技術，能夠檢測本發明所述突變基因群中的全部外顯子區域。

其中所述的二代測序試劑為本領域常規使用的試劑，只要能夠滿足對所得序列進行二代測序的要求即可。所述試劑制備方法為本領域常規制備方法，較佳地為市售可得。

本發明所述檢測試劑盒更佳地還包括將檢測對象中提取的基因組DNA制成可供測序使用的文庫的試劑，該種試劑為本領域常規使用試劑，只要能夠滿足多重PCR對基因組DNA質量的要求即可。所述試劑制備方法為本領域常規制備方法，較佳地為市售可得。