[發(fā)明專利]一種嘔吐毒素核酸適配體親和柱及其制備方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711050103.9
• 申請(qǐng)日: 2017-10-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107807034A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 欒云霞;劉洪美;陸安祥;付海龍;王紀(jì)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究中心
• 主分類號(hào): G01N1/34
• 分類號(hào): G01N1/34;G01N1/40;G01N30/08;B01D15/38;C12N15/115
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002
• 代理人: 王文君,郭奧博

1.一種嘔吐毒素核酸適配體，其特征在于，具體為：5’-GCCCGGATCGAGTTGATTTCAAGCGCATGAAGGCTA-CCCCCCC-NH₂-3’。

2.一種嘔吐毒素核酸適配體親和柱，其特征在于，包括柱管以及填充在所述柱管底部的CNBr活化瓊脂糖凝膠；3’端氨基修飾的嘔吐毒素核酸適配體偶聯(lián)于所述CNBr活化瓊脂糖凝膠的表面；

所述3’端氨基修飾的嘔吐毒素核酸適配體具體為：5’-GCCCGGATCGAGTTGATTTCAAGCGCATGAAGGCTA-CCCCCCC-NH₂-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適配體親和柱，其特征在于，所述CNBr活化瓊脂糖凝膠與3’端氨基修飾的嘔吐毒素核酸適配體的質(zhì)量比1000:0.1～2，優(yōu)選為1000:1。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適配體親和柱，其特征在于，所述CNBr活化瓊脂糖凝膠的填充體積與所述柱管體積之比為(0.4～0.6)：1。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的適配體親和柱，其特征在于，所述柱管的兩端分別蓋有上帽和下帽；所述瓊脂糖凝膠通過(guò)上下各一塊篩板固定在柱管底部。

6.一種嘔吐毒素核酸適配體親和柱的制備方法，其特征在于，將CNBr活化瓊脂糖與核酸適配體5’-GCCCGGATCGAGTTGATTTCAAGCGCATGAAGGCTA-CCCCCCC-NH₂-3’以質(zhì)量比為1000:0.1～2、優(yōu)選為1000:1相偶聯(lián)，充分洗滌后，裝柱。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述核酸適配體在進(jìn)行偶聯(lián)前，先在含有Na₂HPO₄與MgCl₂的緩沖液中復(fù)性；

和/或，所述CNBr活化瓊脂糖在進(jìn)行偶聯(lián)前，先用HCl活化后，再依次用HCl、蒸餾水以及含有Na₂HPO₄與MgCl₂的緩沖液洗滌。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述偶聯(lián)具體為：室溫下震搖反應(yīng)過(guò)夜；所述偶聯(lián)結(jié)束后，用Tris-HCl緩沖液封閉剩余活性位點(diǎn)。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述充分洗滌具體為：用醋酸緩沖液和Tris-HCl緩沖液交替洗滌；

和/或，將所述充分洗滌后的產(chǎn)物懸浮于結(jié)合緩沖液中進(jìn)行狀柱；所述結(jié)合緩沖液的組成優(yōu)選為：10mM Tris，120mM NaCl，5mM KCl，5mM MgCl₂，pH7.5。

10.權(quán)利要求2～5任意一項(xiàng)所述嘔吐毒素核酸適配體親和柱或權(quán)利要求6～9任意一項(xiàng)所述方法制備而成的嘔吐毒素核酸適配體親和柱在富集凈化農(nóng)產(chǎn)品及其制品中所含的嘔吐毒素中的應(yīng)用。