[發明專利]一種吡蟲啉半抗原、完全抗原及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711044873.2
• 申請日: 2017-10-31
• 公開（公告）號: CN107805241B
• 公開（公告）日: 2020-05-26
• 發明（設計）人: 王保民;陳俊玉;王冕;譚桂玉;劉偉華
• 申請（專利權）人: 福建安欣睿捷生物科技有限公司
• 主分類號: C07D401/06
• 分類號: C07D401/06;C07K14/765;C07K1/107;G01N33/535
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發明公開了一種吡蟲啉半抗原、完全抗原及制備方法和應用，所述吡蟲啉半抗原以6?甲基煙酸為原料，先與甲醇反應生成6?甲基煙酸甲酯，6?甲基煙酸甲酯與N?溴代琥珀酰亞胺反應得到6?（溴甲基）煙酸甲酯，再與N?（咪唑烷?2?亞基）硝酰胺反應生成6?（（2?（硝基亞氨基）咪唑烷?1?基）甲基）煙酸甲酯，最后用NaOH水溶液將酯反應成6?（（2?（硝基亞氨基）咪唑烷?1?基）甲基）煙酸，即為吡蟲啉半抗原。將吡蟲啉半抗原與載體蛋白偶聯，制備得到吡蟲啉完全抗原。免疫動物實驗表明本發明制備的人工抗原具有良好免疫原性，本發明的吡蟲啉半抗原和吡蟲啉抗原可用于吡蟲啉免疫分析檢測，應用前景十分廣闊。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種吡蟲啉半抗原、完全抗原及制備方法和應用。

技術背景

吡蟲啉是一種含吡啶環的超高效內吸性殺蟲劑，對纓翅目、鞘翅目、同翅目、鱗翅目及雙翅目等，尤其是對刺吸式口器害蟲如中國梨木虱、桃蚜、小綠葉蟬、蘋果瘤蚜、薊馬、黑尾葉蟬、梨黃粉蚜、白粉虱、梨象甲等具有高殘效和內吸性，能廣泛用于小麥、蔬菜、水稻、棉花等大多數農作物，具有高效、低毒、廣譜強的特點。雖然吡蟲啉效果顯著，使用后蟲害能夠得到有效控制，但該農藥的殘留長，會對人、畜構成威脅，給農產品、食品的銷售及安全出口帶來影響。我國食品安全國家標準GB2763-2016《食品中農藥最大殘留限量》中規定蔬菜大白菜中吡蟲啉的最大殘留限量為0.2mg/kg，水果蘋果、梨中吡蟲啉的最大殘留量為0.5mg/kg。

現有的吡蟲啉檢測主要是液質聯用及酶聯免疫吸附分析方法(ELISA)。ELISA方法簡單、有效、適合現場快速、高能量測定，越來越多地被相關檢疫檢測單位所應用。建立小分子的ELISA檢測方法，其首要條件是進行半抗原和抗原的制備。優秀的半抗原、抗原可以激發被免疫動物產生靈敏度高、特異性好的抗體。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種吡蟲啉半抗原以及吡蟲啉完全抗原，可有效地刺激被免疫動物產生靈敏度高、特異性強的抗體。

本發明的另一個目的在于提供上述吡蟲啉半抗原以及吡蟲啉完全抗原的制備方法，該方法簡單易行。

本發明制備得到的吡蟲啉半抗原和吡蟲啉完全抗原可用于后續吡蟲啉的免疫分析方法建立，應用于食品中吡蟲啉的檢測。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種吡蟲啉半抗原，其分子結構為：

一種吡蟲啉完全抗原，其分子結構為：

所述吡蟲啉半抗原的制備方法，包括以下步驟為：

1)將1份6-甲基煙酸溶解在3-4份甲醇中，加入0.1-0.2份濃硫酸，反應體系65-70℃加熱回流3～4小時，減壓蒸餾除去甲醇，得白色固體粉末，該粉末為6-甲基煙酸甲脂；

2)將1份上述6-甲基煙酸甲脂溶于3-4份四氯化碳中，接著加入1.2-1.5份N-溴代琥珀酰亞胺，待反應體系升溫到80℃，加入0.1-0.2份偶氮二異丁腈或過氧苯甲酰，反應體系70-80℃反應3～4小時，減壓蒸餾除去四氯化碳得褐色液體，該褐色液體用柱色譜純化得白色固體，該白色固體為6-(溴甲基)煙酸甲酯；

3)將1份上述6-(溴甲基)煙酸甲酯溶于3.5-4份乙腈中，加入1-1.2份N-(咪唑烷-2-亞基)硝酰胺和3-3.5份碳酸鉀，反應體系70-80℃反應5-6小時后冷卻并抽濾，濾液濃縮后用柱色譜分離純化得白色固體，該白色固體為6-((2-(硝基亞氨基)咪唑烷-1-基)甲基)煙酸甲酯；