[發明專利]一種誘導大鼠骨髓間充質干細胞分化成破骨樣細胞的方法

在審

• 申請號: 201711029436.3
• 申請日: 2017-10-20
• 公開（公告）號: CN109694850A
• 公開（公告）日: 2019-04-30
• 發明（設計）人: 許健;楊亞洋;沈雯;任軍;許斌;姚葉濤;沈燦
• 申請（專利權）人: 許健;楊亞洋;沈雯
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及細胞生物學及生物醫藥技術領域，本發明公開了一種誘導大鼠骨髓間充質干細胞分化成破骨樣細胞的方法，包括以下步驟：大鼠骨髓間充質干細胞的分離及培養；采用流式細胞術鑒定分離的大鼠骨髓間充質干細胞表面分子；采用硫代乙酰胺誘導大鼠骨髓間充質干細胞3至7天，即可得到破骨樣細胞，經過抗酒石酸酸性磷酸酶染色，免疫印跡技術，免疫熒光技術鑒定后，證實其具有破骨細胞特性，可供科學研究，從而發現一種新型體外獲得破骨細胞生成的體系。此外，本發明所使用的硫代乙酰胺因其價格低廉，容易獲取，使用方便，可作為制備骨與關節病變細胞模型和藥物篩選模型的藥物，彌補了對該病研究的一大缺陷，并具有廣闊的市場應用前景。

技術領域

本發明涉及細胞生物學及生物醫藥技術領域，具體涉及一種誘導大鼠骨髓間充質干細胞分化成破骨樣細胞的方法。

背景技術

我國是世界上老年人口最多的國家，其數量占到了世界老年人口總量的五分之一。按照國際標準，我國早已于1999年進入老齡化社會。隨著老年人口數量的持續增加，特別是肥胖老年人口的增多，骨與關節退行性疾病人群劇增。據統計，65歲以上老年人骨關節疾病患病率高達80％-90％。骨與關節退行性病變得到了我國乃至全球醫學界的廣泛關注，然而，其臨床治療始終是個難題。目前，骨與關節退行性疾病已經成為老年人的常見病和多發病之一，成為繼心腦血管疾病、糖尿病、惡性腫瘤三大慢性病之后對人類威脅最廣泛的疾病，嚴重危害到了老年人的健康和生活質量。骨與關節退行性病是以反復發作的關節疼痛和關節活動障礙為主的慢性退行性病變，其病理變化主要發生在活動關節，特別是負重關節的退行性疾患表現突出。在人體關節中，膝、髖關節除了支撐全身重量外，還要作多種活動，所以膝、髖關節退行性骨關節病最為常見。西醫認為，骨與關節退行性變是多因性的疾病，與衰老、遺傳、內分泌、肥胖、免疫和機械損傷等有關。然而，除了衰老和機械損傷是公認的危險因素外，其他致病因素尚無充分的實驗依據。中醫卻對骨與關節退行性疾病有不同的理解，認為腎主骨、肝主筋，肝腎虧損則不能養骨榮筋。所以，中醫認為骨與關節退行性疾病是因為肝腎虛虧、筋骨失養、長期勞損、氣滯血瘀、風寒濕邪痹阻經脈所致。盡管如此，中、西醫目前尚無法確切闡明骨與關節退行性疾病的直接原因。

骨是由細胞、細胞外基質和無機物組成的結締組織，并通過骨組織細胞進行著骨塑建和重建過程。其中，成骨細胞、骨細胞和破骨細胞是構成骨組織代謝的基本功能細胞，成骨細胞能夠促進骨的形成，而破骨細胞負責骨的吸收。當破骨細胞與成骨細胞作用失衡時就會引起骨與關節的病變。目前，國內外學者對成骨細胞與破骨細胞的形成分化有著極大的興趣，破骨細胞的骨吸收與成骨細胞的骨形成之間的平衡是維持正常骨重建基礎。破骨細胞是體內唯一具有骨質吸收功能的多核巨細胞，骨吸收過程中破骨細胞的形成與活性異常可導致以骨質疏松為代表的骨與關節病變。