[發明專利]改善文庫滾環復制效率均一性的方法、文庫構建方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201711027564.4
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN109722471B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 邱敏;李計廣;王靜靜;劉二凱;黎宇翔;馮太青;馬可心;趙芳;齊曉娟;龍小娟;韋小芳;陳奧;章文蔚;徐崇鈞
• 申請（專利權）人: 深圳華大智造科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C40B50/06
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 孫銀行;彭家恩

1.一種改善文庫滾環復制效率均一性的方法，所述滾環復制效率均一性是指大片段和小片段之間的滾環復制效率趨向一致的表現，其特征在于，所述方法包括：在文庫構建的PCR擴增過程中，引入至少一種修飾的PCR引物，所述修飾的PCR引物在至少一個核苷酸位點上具有至少一個用于減緩滾環復制反應速度的修飾基團。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述核苷酸位點是脫氧胸苷酸位點。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述修飾基團選自生物素、Cy3熒光染料和地高辛中的至少一種。

4.一種用于滾環復制反應的文庫的構建方法，其特征在于，所述方法包括：在文庫構建的PCR擴增過程中，引入至少一種修飾的PCR引物，所述修飾的PCR引物在至少一個核苷酸位點上具有至少一個用于減緩滾環復制反應速度的修飾基團。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)對片段化的核酸進行末端修復和加A尾反應；

(2)對末端修復和加A尾反應后的產物進行接頭連接反應；

(3)對接頭連接反應后的產物進行PCR擴增反應，在該PCR擴增反應中，引入至少一種修飾的PCR引物，所述修飾的PCR引物在至少一個核苷酸位點上具有至少一個用于減緩滾環復制反應速度的修飾基團。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：

(4)在所述PCR擴增反應后，對擴增產物進行單鏈分離和環化反應。

7.根據權利要求4-6任一項所述的方法，其特征在于，所述核苷酸位點是脫氧胸苷酸位點。

8.根據權利要求4-6任一項所述的方法，其特征在于，所述修飾基團選自生物素、Cy3熒光染料和地高辛中的至少一種。

9.一種用于改善文庫滾環復制效率均一性的試劑盒，所述滾環復制效率均一性是指大片段和小片段之間的滾環復制效率趨向一致的表現，其特征在于，所述試劑盒包括：至少一種修飾的PCR引物，所述修飾的PCR引物在至少一個核苷酸位點上具有至少一個用于減緩滾環復制反應速度的修飾基團，所述修飾的PCR引物用作文庫構建的PCR擴增過程中的引物。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述核苷酸位點是脫氧胸苷酸位點。

11.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述修飾基團選自生物素、Cy3熒光染料和地高辛中的至少一種。

12.一種用于構建滾環復制文庫的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：至少一種修飾的PCR引物，所述修飾的PCR引物在至少一個核苷酸位點上具有至少一個用于減緩滾環復制反應速度的修飾基團，所述修飾的PCR引物用作文庫構建的PCR擴增過程中的引物。

13.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括如下至少一項：

末端修復試劑；

加A尾反應試劑；

接頭序列；

PCR擴增反應試劑；

線性核酸消化酶；以及

核酸片段化酶。

14.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述核苷酸位點是脫氧胸苷酸位點。

15.根據權利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述修飾基團選自生物素、Cy3熒光染料和地高辛中的至少一種。