[發明專利]一種通過誘導不定芽獲得大花萱草再生植株的方法

在審

• 申請號: 201711025807.0
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN109717075A
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發明（設計）人: 楊柳燕;王藝程;張永春;蔡友銘
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司 31114
• 代理人: 張曉敏;費開逵

一種通過誘導不定芽獲得大花萱草再生植株的方法，以大花萱草的根莖幼芽為外植體材料，直接誘導產生不定芽，切分成單株進行增殖培養，獲得叢生芽，將叢生芽切分成單株，去除不定芽、愈傷組織及多余的底盤，進行生根培養，得到生根苗，再進行煉苗、移栽，獲得大花萱草再生植株。該方法操作簡單，縮短了誘導及繁育時間，誘導率高，誘導時間短，生根率高，移栽成活率高，獲得的再生植株能夠穩定保持母本優良性狀，克服了通過愈傷組織途徑中后代植株出現變異的弊端，實現大花萱草組培苗的直接再生，是大花萱草工廠化生產的有效途徑。

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及一種通過誘導不定芽獲得大花萱草再生植株的方法。

背景技術

萱草(Hemerocallis)又稱金針、忘憂草、黃花菜、宜男草、療愁等，是百合科萱草屬多年生宿根草本花卉，其形態優美、花色繁多、生長健壯、適應廣泛等優點，是庭院、花壇、以及街道綠化中重要的花卉。

大花萱草(Hemerocallis fulva)也稱多倍體萱草、一日花，是在萱草的基礎上，經過處理的多倍體矮生品種。萱草的繁殖方法主要有種子育苗法、莖芽扦插繁殖法、分株繁殖法、組織培養法。

播種繁殖出的實生苗更能適應較寒冷的氣候，但生產周期長，且后代容易發生分離、變異、退化，目前主要用于新品種選育。莖芽扦插繁殖方法操作簡單，成本低，周期也較短，但各品種的生根率存在較大的差異，其整體的生根數量較少。分株繁殖法是傳統上最常用的方法，后代植株能保持母本性狀，但1株萱草每年只能繁殖4-5株，整體繁殖系數較低，不適應大規模的商業生產。而利用植物組織培養法，僅需用少量的植物材料，就可以在短時間內獲取大量的、保持繁殖品種本身所具有的優良性狀的種苗，是工廠化育苗的重要途徑。

目前，國內外很多學者對大花萱草離體培養進行了研究，一般通過誘導愈傷組織的途徑再生完整植株，建立其再生體系，其外植體材料選擇相當豐富，有花莖、子房、花瓣、花托、花絲、花蕾、葉片、原生質體等。

但是，通過愈傷組織途徑獲得的植株，隨著繼代次數增加，染色體數目、DNA含量、DNA多態性片段比例會出現不同程度的變異，而利用大花萱草組織直接誘導不定芽的研究報道極少。

發明內容

本發明的目的在于提供一種通過誘導不定芽獲得大花萱草再生植株的方法，該方法操作簡單，縮短了誘導及繁育時間，誘導率高、誘導時間短，誘導率可達560％，誘導時間可縮短至35天左右，生根率可達100％，移栽成活率可達100％，獲得的再生植株能夠穩定保持母本優良性狀，克服了通過愈傷組織途徑中后代植株出現變異的弊端，實現大花萱草組培苗的直接再生，是大花萱草工廠化生產的有效途徑。

為了達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種通過誘導不定芽獲得大花萱草再生植株的方法，包括以下步驟：

1)外植體選擇、預處理

選取長度為1-2cm的根莖幼芽作為外植體，去除根系及葉片，消毒，無菌水浸洗，吸干水分，除去基部老化組織；

2)誘導不定芽

將經過預處理的外植體，接種于誘導培養基中，誘導培養28-35天，得到不定芽；

其中，培養條件為：溫度23-27℃，濕度60-80％，光照10-12h/d，光照強度為1500-2500LX；

3)增殖培養

將步驟2)中獲得的不定芽切分為單株，切去多余的基部組織以及愈傷組織，接種至增殖培養基中，培養28-35天，得到叢生芽；

其中，培養條件為：溫度23-27℃，濕度60-80％，光照10-12h/d，光照強度為1500-2500LX；

4)生根培養