[發(fā)明專利]一種提高鼠李糖脂產(chǎn)量的銅綠假單胞菌及其構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711021178.4
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN108060111B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱坤;于海英
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/78;C12P19/44;C12R1/385
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

1.一種提高鼠李糖脂產(chǎn)量的銅綠假單胞菌，其特征在于，該銅綠假單胞菌的基因組中，在pslABCDEFGHIJKLMNO胞外多糖合成基因簇的缺失位置處過表達(dá)rmlACBD，在pelABCDEFG多糖合成基因簇的缺失位置處過表達(dá)rhlYZ和algC，在藻酸鹽合成基因簇algD-alg8-alg44-algKEGXLIJF的缺失的位置處過表達(dá)fadD4和lipC，在聚羥基脂肪酸PHA合成關(guān)鍵基因簇phaC1-D-C2缺失的位置處過表達(dá)estA。

2.一種權(quán)利要求1所述銅綠假單胞菌的構(gòu)建方法，其特征在于，在銅綠假單胞菌中，將A組中的基因敲除或敲降，同時，在銅綠假單胞菌中將B組中的基因過表達(dá)；A組中的基因包括pslABCDEFGHIJKLMNO胞外多糖合成基因簇、pelABCDEFG多糖合成基因簇、藻酸鹽合成基因簇algD-alg8-alg44-algKEGXLIJF以及聚羥基脂肪酸PHA合成關(guān)鍵基因簇phaC1-D-C2；B組中的基因包括rmlACBD、rhlYZ、algC、fadD4、lipC以及estA；提高鼠李糖脂產(chǎn)量的銅綠假單胞菌的構(gòu)建方法包括以下步驟：

以銅綠假單胞菌PAO1為出發(fā)菌株，將出發(fā)菌株的pslABCDEFGHIJKLMNO胞外多糖合成基因簇敲除的同時將dTDP-L-鼠李糖前體合成的關(guān)鍵基因rmlACBD基因簇整合到psl缺失的位置，rmlACBD基因簇受lac啟動子調(diào)控,得到菌株P(guān)A111；

在菌株P(guān)A111的基礎(chǔ)上，連續(xù)敲除pelABCDEFG多糖合成基因簇，同時將受lac啟動子調(diào)控的烯酯酰-CoA水合酶/異構(gòu)酶rhlYZ和葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖磷酸變位酶algC整合到pel基因簇缺失的位置，得到菌株P(guān)A112；

在菌株P(guān)A112的基礎(chǔ)上，連續(xù)敲除藻酸鹽合成基因簇algD-alg8-alg44-algKEGXLIJF，同時將受lac啟動子調(diào)控的脂肪酸激活蛋白FadD4和脂酶LipC整合到alg基因缺失的位置，得到菌株P(guān)A113；

在菌株P(guān)A113的基礎(chǔ)上，連續(xù)敲除聚羥基脂肪酸PHA合成關(guān)鍵基因簇phaC1-D-C2，同時將受lac啟動子調(diào)控的酯酶estA整合到pha基因簇敲除的位置，得到菌株P(guān)A114。

3.一種利用權(quán)利要求1所述銅綠假單胞菌生產(chǎn)鼠李糖脂的方法，其特征在于，包括以下步驟：將權(quán)利要求1所述銅綠假單胞菌發(fā)酵，得到鼠李糖脂。