[發明專利]一種高效液相色譜法測定海產品中抗生素類藥物的方法

在審

• 申請號: 201711016429.X
• 申請日: 2017-10-27
• 公開（公告）號: CN107727770A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 張恒南;張靜;高靜;吳文海
• 申請（專利權）人: 榮成市東宇儀器有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于海洋食品檢測領域，特別涉及一種高效液相色譜法測定海產品中抗生素類藥物的方法。

背景技術

抗生素廣泛應用于治療動物的多種細菌性感染疾病。抗生素類藥物主要是通過注射、口服、飲水等方式進入動物體內。有些抗生素類還被作為飼料添加劑，用來預防動物細菌性疾病和促進動物生長而被長期使用。如土霉素添加劑、金霉素添加劑等經口腔進入動物體內，短時間不能完全排出，極易在體內蓄積，造成肉類食品中的抗生素藥物殘留。

由于抗生素的廣泛使用，使得細菌的耐藥性不斷增加，食用含抗生素殘留的肉類食品后，人體內細菌的耐藥性增加。同時，動物體內的耐藥性菌株的耐藥性也可能轉移到人體細菌中，從而對人類產生極大的危害。因此，對肉類食品進行抗生素殘留檢測對保證食品安全具有重要意義。

海產品的高脂肪、高蛋白特性以及待測目標物的兩性性質使得常規的檢測方法結果的準確度不高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種簡便、快速有效的高效液相色譜法測定海產品中抗生素類藥物的方法，解決常規的檢測方法結果的準確度不高的技術問題為解決以上技術問題，本發明采用的技術方案是：

本發明所述的高效液相色譜法測定海產品中抗生素類藥物的方法，萃取劑為含有乙酸的乙腈水溶液，其中乙腈水溶液中乙腈與水的體積比為：乙腈∶水＝8∶2，乙酸的含量為乙腈水溶液體積的1％。

優選的，采用的微萃取劑為體積分數為1％的乙酸水溶液。

優選的，液相色譜采用的流動相為：流動相A：0.5％乙酸水溶液，流動相B：乙腈。

優選的，流動相的流速：0.7ml/min；梯度洗脫條件：0-18min，90％-82％A；18-23min，82％-65％A；23-26min，65％A；26-27min，65％-90％A；27-35min，90％A。

優選的，液相色譜的紫外檢測波長λ＝280nm。

優選的，檢出限為0.0218～0.0902ug/g，定量限為0.0725-0.3007ug/g。

優選的，步驟包括分析溶液的制備，具體為：

準確稱取均質后的魚肉組織于離心管中，向離心管中加入含有乙酸的乙腈水溶液、硫酸鎂、氯化鈉，充分搖勻后離心，取萃取液，氮吹濃縮，得到濃縮后的萃取液；

將乙酸水溶液作為微萃取劑，與上述濃縮后的萃取液混合后，加入環己烷，混勻離心，吸取水相沉積相，用含有乙酸的乙腈水溶液等體積稀釋后，作為分析溶液。

優選的，步驟包括檢測樣品制備，具體為：

1.0g均質后的魚肉組織樣品于5ml聚四氟乙烯離心管中，向離心管中加入1ml含有體積百分數為1％乙酸的乙腈水溶液、0.4g硫酸鎂、0.1g氯化鈉，充分搖勻后離心，取萃取液氮吹濃縮至200ul，得到濃縮后的萃取液；

將50ul的體積百分數為1％的乙酸水溶液作為微萃取劑，與濃縮后的萃取液混合后，加入3ml環己烷，混勻離心，吸取水相沉積相，用體積百分數為1％乙酸的乙腈水溶液等體積稀釋后，作為分析溶液；

其中，乙腈水溶液中乙腈與水的體積比為乙腈∶水＝8∶2。

與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：

針對海產品的高脂肪、高蛋白特性以及待測目標物的兩性性質，建立QuEChERS-反相-分散液液微萃取新方法，QuEChERS法能夠快速有效第從海產品中萃取目標物，同時去除蛋白質；反相-分散液液微萃取法采用非極性體系，以水溶液為微萃取劑，以萃取劑為分散劑，能夠對萃取液中目標物進行快速的分離富集，同時除去萃取液中脂肪，該方法融合了QuEChERS法和液相微萃取新方法，適用于海產品抗生素簡便、快速、有效的檢測。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明進行詳細闡述。

實施例1

1)標準溶液的配制

準確稱取磺胺嘧啶1.8mg、磺胺甲基嘧啶1.9mg、氧氟沙星2.5mg、四環素2.5mg、恩諾沙星1.9mg、強力霉素2.3mg、磺胺甲噁唑2.5mg，分別置于10ml棕色容量瓶，用甲醇使其完全溶解并定容，制得抗生素類藥物的儲備標準溶液。各抗生素藥品的標準儲備液濃度分別為：磺胺嘧啶180ug/ml、磺胺甲基嘧啶190ug/ml、氧氟沙星250ug/ml、四環素250ug/ml、恩諾沙星190ug/ml、強力霉素230ug/ml、磺胺甲噁唑250ug/ml。用封口膜密封，存在冰箱4℃冷藏，避光保存。

2)海魚樣品前處理