[發(fā)明專(zhuān)利]一種具有降血壓降血脂功效的絞股藍(lán)生物活性物質(zhì)與人源干細(xì)胞活性因子組合物的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711014620.0
• 申請(qǐng)日: 2017-10-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107744525A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-03-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張正亮;吳茂林
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 安徽科門(mén)生物科技有限公司;安徽利民生物科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K35/28
• 分類(lèi)號(hào): A61K35/28;C08B37/00;A61P9/12;A61P3/06;A61P3/10;A61P1/16;A61P29/00;A61P39/02;A61P11/14;A61P11/10;A61K31/715
• 代理公司: 北京力量專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)11504
• 代理人: 毛雨田

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種具有降血壓降血脂功效的絞股藍(lán)生物活性物質(zhì)與人源干細(xì)胞活性因子組合物的制備方法。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞是干細(xì)胞家族的重要成員，來(lái)源于發(fā)育早期的中胚層，屬于多能干細(xì)胞，MSC最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。

如間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細(xì)胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種具有降血壓降血脂功效的絞股藍(lán)生物活性物質(zhì)與人源干細(xì)胞活性因子組合物的制備方法，

本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種具有降血壓降血脂功效的絞股藍(lán)生物活性物質(zhì)與人源干細(xì)胞活性因子的制備方法，該方法包括如下步驟：

S1、人源間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)；

S2、細(xì)胞培養(yǎng)至若干小時(shí)后，收集上清至離心管，過(guò)濾上清除菌；

S3、加入生理鹽水繼續(xù)培養(yǎng)12小時(shí)，破碎細(xì)胞離心過(guò)濾膜得到干細(xì)胞提取液；

S4、絞股藍(lán)中提取粗糖；

S5、粗糖提純得到多糖粉末；

S6、將干細(xì)胞提取液與多糖粉末按照質(zhì)量比5-6：1充分混合即得。

進(jìn)一步地，所述S1的具體步驟為，取人源間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇后，用生理鹽水重懸，懸液接種于完全培養(yǎng)基中，置于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)24h后第一次換液并去除貼壁細(xì)胞，之后每隔2d換液一次，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至85％匯合度后以1：2比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

進(jìn)一步地，所述完全培養(yǎng)基為DF12培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基中含體積分?jǐn)?shù)為2％胎牛血清、40％MCDB201、10μg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子、10μg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、10μg/L表皮生長(zhǎng)因子。

進(jìn)一步地，所述S4的具體步驟為，稱(chēng)取絞股藍(lán)破碎后，加入95％乙醇溶解后回流提取，常溫?fù)]發(fā)乙醇得到絞股藍(lán)粉末，將絞股藍(lán)粉末分散于蒸餾水中，提取收集上清液，將上清液減壓濃縮至原體積的1/3，離心除去沉淀，上清液加入乙醇溶液，靜置、離心得到白色絮狀沉淀，將白色絮狀沉淀分散于無(wú)水乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢韬箅x心，沉淀真空干燥得到粗糖粉末。

進(jìn)一步地，所述S5中的具體步驟為，將粗糖粉末分散于蒸餾水中，4℃靜置12-16h后離心，上清液加入至氯仿-正丁醇混合溶液中，固液比為5-6：1，其中所述混合溶液中氯仿與正丁醇的體積比為5：1，混合溶液離心得到多糖粉末。

進(jìn)一步地，一種具有降血壓降血脂功效的絞股藍(lán)生物活性物質(zhì)與人源干細(xì)胞活性因子的制備方法，其特征在于，干細(xì)胞提取液與多糖粉末按照質(zhì)量比5-6：1充分混合后得到。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明將人源與植物源干細(xì)胞性質(zhì)生物活性提取物進(jìn)行配伍，在發(fā)揮各自?xún)?yōu)勢(shì)的基礎(chǔ)上協(xié)同作用，使之發(fā)揮更大的綜合效應(yīng)，所制備的組合物治療高血壓、高血脂、高血糖，脂肪肝等癥。有消炎解毒、止咳祛痰、保肝解毒、降血壓、降血脂血糖的功效。

當(dāng)然，實(shí)施本發(fā)明的任一產(chǎn)品并不一定需要同時(shí)達(dá)到以上所述的所有優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明為一種具有降血壓降血脂功效的絞股藍(lán)生物活性物質(zhì)與人源干細(xì)胞活性因子組合物的制備方法，該方法具體步驟如下：

實(shí)施例1

S1、取人源間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇后，用生理鹽水重懸，懸液接種于完全培養(yǎng)基中，置于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)24h后第一次換液并去除貼壁細(xì)胞，之后每隔2d換液一次，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至85％匯合度后以1：2比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)；

所述完全培養(yǎng)基為DF12培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基中含體積分?jǐn)?shù)為2％胎牛血清、40％MCDB201、10μg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子、10μg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、10μg/L表皮生長(zhǎng)因子；

S2、細(xì)胞培養(yǎng)至若干小時(shí)后，收集上清至離心管，0.22μm濾膜過(guò)濾上清除菌；