[發明專利]一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽及其應用

在審

• 申請號: 201711012978.X
• 申請日: 2017-10-26
• 公開（公告）號: CN107602664A
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 王斌;趙文浩;潘欣;趙玉勤
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/20;A61K38/08;A61P3/06;A23L33/18
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙)33213
• 代理人: 吳秉中

1.一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽，其特征在于：所述源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽的氨基酸序列為：Gly-Ile-Glu-Trp-Ala(GIEWA)，分子量為574.64Da。

2.根據權利要求1所述的一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽，其特征在于：所述的源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽的制備方法為：

預處理：鮸魚魚鰾經清洗、勻漿至糊狀后，按照料液比1g:10-15mL加入NaOH溶液浸泡，過濾，用蒸餾水洗至中性，按照料液比1g：5-8mL加入異丙醇溶液脫脂，過濾，固體物用蒸餾水將異丙醇沖洗干凈，干燥，得脫脂鮸魚魚鰾；

酶解：取脫脂鮸魚魚鰾，按料液比1g:5-8mL加入蒸餾水，調節pH值，加入堿性蛋白酶，酶解，酶解結束后于90-100℃滅酶10-15分鐘，冷卻至室溫后于12000-12500rmp離心15-20分鐘，收集上清液，得鮸魚魚鰾酶解液；

提取：將鮸魚魚鰾酶解液經截留分子量為10kDa和3kDa的超濾膜進行分級，收集截留分子量小于3kDa的組分，得到超濾酶解液；將超濾酶解液依次經離子交換樹脂層析、凝膠柱層析和反相高效液相色譜（RP-HPLC）純化，得到鮸魚魚鰾降血脂五肽。

3.根據權利要求2所述的一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽的制備方法，其特征在于：所述的預處理步驟中NaOH溶液的濃度為0.1-0.12mol/L，浸泡溫度為4-6℃，浸泡時間為12-15小時，異丙醇溶液的質量分數為10-12%，脫脂時間為36-48小時。

4.根據權利要求2所述的一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽及其應用，其特征在于：所述酶解步驟中的堿性蛋白酶的加入量為魚鰾重量的2-3%，堿性蛋白酶的酶活力≥2.0×10⁵U/g，酶解溫度為50-60℃，pH為9-10，酶解時間為3-4小時。

5.根據權利要求2所述的一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽及其應用，其特征在于：所述的提取步驟中的離子交換樹脂層析為：將超濾酶解液用雙蒸水配成濃度為45-55mg/mL的溶液，3-4℃、12000-12500r/min離心15-20分鐘，去除不溶性雜質；取上清液加入到DEAE-52陰離子交換樹脂層析柱，依次用蒸餾水、0.1mol/L、0.5mol/L和1mol/L的NaCl溶液洗脫，收集0.5mol/LNaCl洗脫組分，即為離子交換層析酶解物。

6.根據權利要求2所述的一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽及其應用，其特征在于：所述提取步驟中的凝膠柱層析為：將離子交換層析酶解物溶于雙蒸水配成濃度為45-55mg/mL的溶液，3-4℃、12000-12500r/min離心15-20分鐘，去除不溶性雜質；取上清液經過葡聚糖凝膠SephadexG-25柱層析分離，用超純水進行洗脫，根據280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，其中，降血脂活性最強組分為凝膠層析酶解物。

7. 根據權利要求1所述的一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽及其應用，其特征在于：所述提取步驟中的RP-HPLC純化為：將凝膠層析酶解物用雙蒸水配成80-100μg/mL的溶液，利用RP-HPLC進行純化， RP-HPLC純化條件為：進樣量為10-15μL；色譜柱KromasilC₁₈（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為40%乙腈；洗脫速度為0.8-1.0mL/min；紫外檢測波長為280nm；根據各組分降血脂活性篩選獲得降血脂五肽Gly-Ile-Glu-Trp-Ala(GIEWA)。

8.一種源于鮸魚魚鰾的降血脂五肽的應用，其特征在于：所述的降血脂五肽作為降血脂活性成分、保健產品和食品添加劑的應用。