[發明專利]可利霉素生物合成基因簇

有效

• 申請號: 201711008720.2
• 申請日: 2015-12-31
• 公開（公告）號: CN107868789B
• 公開（公告）日: 2020-11-17
• 發明（設計）人: 王以光;姜洋;趙小峰;赫衛清;戴劍漉
• 申請（專利權）人: 沈陽福洋醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N1/21;C12R1/465
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司 11223
• 代理人: 另婧

1.一種4”-異戊酰螺旋霉素Ⅰ生物合成基因簇，其特征是，所述生物合成基因簇的基因共有43個基因，具體為：

(1)聚酮合酶基因orf10-14，共5個基因；

(2)與聚酮合成延長單位及修飾相關的基因orf1、orf5-6、15、36-39，共有8個基因；

(3)與糖基合成相關基因orf9、16-22、24、26、28、29、33-35、41，共16個基因；

(4)與糖基轉移相關基因orf7、8、30-32、40，共6個基因；

(5)與抗性相關基因orf3和25，共2個基因；

(6)與生物合成調控相關基因orf 2、23、27、42，共4個基因；

(7)外源引入的基因工程菌標記基因orf43和與之連鎖的碳霉糖4”-O-異戊酰轉移酶基因orf44，共2個基因；

其中，各基因的核苷酸序列分別選自Seq.1中的orf1(1-645)、orf2(1810-1208)、orf3(3133-2285)、orf5(4846-5511)、orf6(7150-5801)、orf7(8444-7179)、orf8(9729-8482)、orf9(10543-9830)、orf10(16215-10543)、orf11(21076-16328)、orf12(32511-21124)、orf13(38599-32585)、orf14(52259-38643)、orf15(53099-54310)、orf16(54495-54845)、orf17(54842-56041)、orf18(56038-56946)、orf19(56930-57967)、orf20(57937-60174)、orf21(60836-61984)、orf22(62796-62077)、orf23(63633-65645)、orf24(67379-66318)、orf25(69004-67352)、orf26(69349-70650)、orf27(72156-70708)、orf28(72422-73462)、orf29(74601-73561)、orf30(74913-76160)、orf31(76218-77486)、orf32(77606-78781)、orf33(78783-79775)、orf34(79772-80779)、orf35(82055-80823)、orf36(83164-82052)、orf37(84400-83279)、orf38(84713-84393)、orf39(85576-84710)、orf40(85825-87042)、orf41(87094-87702)、orf42(89315-88143)，以及與Seq1.不連鎖的外源基因Seq.2中的orf43(866-60)和orf44(2337-1174)。

2.如權利要求1所述生物合成基因簇，其特征是，所述的5個聚酮合酶基因編碼聚酮體生物合成酶，所述聚酮體生物合成酶催化可利霉素16元內酯環的合成，所述5個聚酮合酶基因orf10-14的核苷酸序列或互補序列所對應的氨基酸序列為IA-W10如Seq.12所示、IA-W11如Seq.13所示、IA-W12如Seq.14所示、IA-W13如Seq.15所示和IA-W14如Seq.16所示。

3.如權利要求1或2所述的生物合成基因簇，其特征是，5個聚酮合酶包含模塊或結構域，即酮基合成酶(KS)、酰基轉移酶(AT)、酮基還原酶(KR)、脫水酶(DH)、烯酰基還原酶(ER)、酰基載體蛋白(ACP)、硫酯酶結構域的核苷酸序列或互補序列所對應的氨基酸序列。