[發明專利]一種基于液液萃取-液相色譜-串聯質譜同時測定植物油脂中黃曲霉毒素和香味劑的方法

有效

• 申請號: 201711008538.7
• 申請日: 2017-10-25
• 公開（公告）號: CN107907600B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 趙洪霞;曲寶成;姜菁秋;王琰
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 大連理工大學專利中心 21200
• 代理人: 溫福雪;侯明遠

1.一種基于液液萃取-液相色譜-串聯質譜同時測定植物油脂中黃曲霉毒素和香味劑的方法，其特征在于，步驟如下：

(1)液液萃取：向待測油脂和空白油脂樣品中加入提取溶劑，渦旋震蕩、超聲和離心，得到上層清液，待凈化；

(2)液液分配凈化：在上層清液中添加凈化熔劑，渦旋振蕩，離心后，取下層清液，過微孔濾膜，得待測液和空白基質提取液；

(3)標準溶液配制：首先，將質量比為1的香蘭素、甲基香蘭素和乙基香蘭素用甲醇溶解并定容，得1.0mg/mL標準儲備液，再用乙腈稀釋至1.0mg/L混合標準儲備液1；

分別配制濃度為0.1mg/L的黃曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、AFM1和AFM2標準溶液，為混合標準儲備液2；

分別吸取混合標準儲備液1和混合標準儲備液2，混合；再用空白基質提取液稀釋至含香蘭素分別為10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、80ng/mL、160ng/mL，含黃曲霉毒素AFB1分別為0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的混合標準系列工作溶液；

(4)定性定量分析：將步驟(2)得到的待測液進入液相色譜-串聯質譜儀，采用多反應監測正模式監測，外標法定量；

a)定性分析：利用LC-MS/MS法測定試樣和建立標準工作曲線，若待測液中檢出的色譜峰的保留時間與相應標準物質色譜峰的保留時間一致，允許偏差小于2.5％；再進一步比較待測樣品和標準工作液中濃度接近的各組分定性離子的豐度，偏差不超過表1規定的范圍，則判定油脂樣品中存在對應的待測樣品；

表1 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度	＞50％	20％-50％	10％-20％	≦10％
允許的最大偏差	20％	25％	30％	50％

b)定量分析：利用LC-MS/MS法測定混合標準系列工作溶液，得到相應的標準溶液的色譜峰面積，以混合標準工作液的濃度為橫坐標，以色譜峰的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；再以相同條件測定待測樣品，得到待測樣品的色譜峰面積，根據標準工作曲線得到待測液中各組分的濃度；待測樣品中各待測組分的響應值在標準工作曲線的線性響應范圍內，如果含量超出范圍，則重新取待測樣品分析，然后用乙腈稀釋到適當濃度后分析；

⑸結果計算：

計算公式：

式(1)中：

X—油脂樣品中待測組分的含量，單位為μg/kg；

c—從標準工作曲線中讀出的待測樣品中各待測組分的濃度，單位為μg/L；

m—油脂樣品稱取的質量，單位為g；

V—油脂樣品溶液定容體積，單位為mL；

所述的液相色譜-串聯質譜法測試條件如下：

所述的LC-MS/MS的色譜條件如下：

色譜柱：Agilent XDB C18反相柱，色譜柱規格4.6×50mm，2.7μm；

流動相：A相：水溶液，含0.1％甲酸，B相：甲醇；

梯度洗脫時間：12min；

梯度洗脫程序：0→0.5min，75％A相；0.5→2min，75％→50％A相；2→6min，50％A相；6→7min，50％→10％A相；7→9min，10％A相；9→12min，10％→75％A相；

流速：0.3mL/min；

進樣量：2μL；

色譜柱溫度：30℃；

所述的LC-MS/MS的質譜條件如下：

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：多反應監測；

離子化電壓：5500V；

霧化氣：50-60psi

輔助氣：50-60psi

氣簾氣壓力：35psi；

霧化溫度：500-550℃。