[發(fā)明專(zhuān)利]大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711006838.1
• 申請(qǐng)日: 2017-10-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107907618A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣心惠;黃丹;杜婷婷
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 重慶醫(yī)科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/06
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/06;G01N30/62;G01N30/86
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、標(biāo)準(zhǔn)品的配制；

步驟二、用硼氫化鈉將樣品進(jìn)行還原；

步驟三、除血漿樣品中的蛋白質(zhì)；

步驟四、HPLC-ECD分離測(cè)定血漿樣品中高半胱氨酸和半胱氨酸。

步驟五、結(jié)果計(jì)算。

2.如權(quán)利要求1所述的大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟一中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的配制具體方法為：

以高半胱氨酸，半胱氨酸和香草酸為標(biāo)準(zhǔn)品，分別用0.1mol/L高氯酸溶液配制成濃度為1mg/mL的儲(chǔ)備液，備用。

3.如權(quán)利要求1所述的大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟二中對(duì)樣品的還原的具體方法為：

步驟a、配制1.5mol/L NaoH溶液，稱取適量硼氫化鈉溶于1.5mol/L NaoH溶液中，使硼氫化鈉的濃度為2mol/L；

步驟b、取100μL血漿樣品，向樣品中加入10μL 2mol/L的硼氫化鈉溶液，渦旋1min，靜置反應(yīng)5min。

4.如權(quán)利要求1所述的大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟三中除血漿樣品中蛋白質(zhì)的具體方法為：

按樣品和高氯酸按體積比為1∶3向步驟一中的樣品加入300μL 0.4mol/L高氯酸(含內(nèi)標(biāo)，香草酸2μg/mL)，渦旋混勻1min，15000×g，4℃離心15min，取上清液供HPLC-ECD測(cè)定。

5.如權(quán)利要求1所述的大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟四中HPLC-ECD分離測(cè)定血漿樣品中高半胱氨酸和半胱氨酸，測(cè)定條件如下：

檢測(cè)器：島津ED723電化學(xué)檢測(cè)器；

色譜柱：依利特C8(E2020417，4.6mm×250mm，5μm)；

流動(dòng)相A：甲醇；

流動(dòng)相B：30mmol/L醋酸鈉，100μmol/L辛烷磺酸鈉，pH＝5.02，

等度洗脫，洗脫程序?yàn)椋篈∶B＝0.1∶99.9；

柱溫：30℃；

流速：0.7mL/min；

檢測(cè)電壓：900mv；

進(jìn)樣量：20μL。

6.如權(quán)利要求1所述的大鼠血漿中高半胱氨酸和半胱氨酸的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟五中結(jié)果計(jì)算具體為：

按公式(1)計(jì)算樣品中高半胱氨酸的含量；按公式(2)計(jì)算樣品中半胱氨酸的含量；

Y＝0.8499X+0.0288(1)

Y＝0.5278X-0.0014(2)

式中：

Y：待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積之比；

X：待測(cè)物的濃度，單位為微克每毫升。