[發(fā)明專利]一種細(xì)胞穿透肽和細(xì)胞穿透肽復(fù)合物及二者的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711001060.5
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN108070025B
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪華;李小龍;趙龍;張雁
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)附屬口腔醫(yī)院;廣州一代醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/00
• 分類號(hào): C07K14/00;A61K47/64;A61K51/08;A61K51/06;A61K49/00
• 代理公司: 44100 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 曹愛紅<國際申請>=<國際公布>=<進(jìn)入

本發(fā)明提供一種細(xì)胞穿透肽和細(xì)胞穿透肽復(fù)合物及二者的應(yīng)用。本發(fā)明提供的細(xì)胞穿透肽，其選自如下氨基酸序列：序列1、序列2、序列3、序列4或序列5所示的氨基酸序列，或與序列1?5中的任一序列具有至少50％同一性的氨基酸序列。本發(fā)明提供了一種易于制備，分子量小，不易產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，穿透能力強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)半衰期長的穿透性多肽(或稱為細(xì)胞穿透肽)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞膜穿透肽和細(xì)胞穿透肽復(fù)合物，還涉及該細(xì)胞穿透肽和細(xì)胞穿透肽復(fù)合物的應(yīng)用。

背景技術(shù)

細(xì)胞膜是一種磷脂雙分子層，它是細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境間的半透性屏障，具有選擇通透性，保證了細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定性。細(xì)胞膜屏障能夠阻止某些物質(zhì)，特別是有害物質(zhì)由血液進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，有助于維持細(xì)胞的正常功能活動(dòng)。青霉素作用于原核細(xì)胞的細(xì)胞壁，青霉素的結(jié)構(gòu)與細(xì)胞壁的成分粘肽結(jié)構(gòu)中的D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可與后者競爭轉(zhuǎn)肽酶，阻礙粘肽的形成，造成細(xì)胞壁的缺損，使細(xì)菌失去細(xì)胞壁的滲透屏障，對細(xì)菌起到殺滅作用。真核細(xì)胞缺乏細(xì)胞壁，因此青霉素對真核生物幾乎無任何毒性作用。近年發(fā)現(xiàn)真核生物一項(xiàng)重要的細(xì)胞免疫機(jī)制是攻擊靶細(xì)胞的細(xì)胞膜完整性。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)的細(xì)胞質(zhì)中儲(chǔ)存有細(xì)胞膜成孔蛋白(Pore-forming protein)，又稱穿孔素(Perforin)。當(dāng)與病毒感染的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞等靶細(xì)胞密切接觸相互作用后，CTL和NK細(xì)胞釋放穿孔素，在靶細(xì)胞的細(xì)胞膜上形成多聚穿孔素管狀通道，導(dǎo)致靶細(xì)胞迅速溶解破壞。穿孔素分子量為67kDa左右，由534個(gè)氨基酸組成。12-16個(gè)穿孔素分子插入靶細(xì)胞膜，多聚化形成多個(gè)異常的管狀通道，其內(nèi)徑平均約16nm。細(xì)胞外的Na+、水分經(jīng)該管道流入細(xì)胞內(nèi)，而細(xì)胞內(nèi)的K+及大分子物質(zhì)經(jīng)該管道流出，引起細(xì)胞滲透壓改變，迅速導(dǎo)致細(xì)胞溶解死亡。然而，類似穿孔素的細(xì)胞膜破壞藥物分子罕見報(bào)道，發(fā)明穿孔素類的藥物無疑將開辟腫瘤和病毒等疾病治療的新途徑。

細(xì)胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPPs)首先發(fā)現(xiàn)于1型人免疫缺陷病毒轉(zhuǎn)錄激活因子TAT(human immunodeficiency virus-1 transcription activator，HIV-1TAT)，TAT具有一個(gè)活化域(序列37-48，regionⅡ)，核定位域(序列49-57，regionⅢ)，還有一個(gè)活化增強(qiáng)域(序列58-72，regionⅣ)，它對病毒轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核發(fā)揮著重要作用。隨著細(xì)胞穿透肽(cell penetrating peptides，CPPs)的發(fā)現(xiàn)和研究深入，CPPs藥物開發(fā)逐漸顯露出誘人的應(yīng)用前景。近年的研究確定CPPs是一類以非受體依賴方式穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞的多肽，由50個(gè)左右氨基酸組成，可以通過人工合成，具有細(xì)胞毒性低，穿透能力強(qiáng)，免疫反應(yīng)小，細(xì)胞代謝慢等優(yōu)點(diǎn)。CPPs可以攜帶多種不同大小和性質(zhì)的生物活性物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，包括難以穿透細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)、多肽、寡鏈核苷酸、小分子化合物、染料、多肽核酸(peptidenucleo acid,PNA)、質(zhì)粒DNA、siRNA、200nm的脂質(zhì)體、噬菌體顆粒和超順磁性粒子等，這一性質(zhì)為其成為靶向藥物的良好載體提供了可能。