[發明專利]一種微流體裝置及基于微流體裝置的單細胞核酸適體單輪篩選方法

有效

• 申請號: 201711000204.5
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN109694806B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 譚蔚泓;蔣健暉;趙子龍
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12N15/10;C12N15/115
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 馬強;周棟

1.一種單細胞核酸適體單輪篩選方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1、將靶細胞樣品注射進入微流體裝置，控制流體速度為50-100微升/分鐘，使細胞分散于微流體裝置的微室中；

S2、將設計和合成的核酸適體文庫與參比細胞孵育，然后離心，棄去與參比細胞結合的核酸適體，將未與參比細胞結合的核酸適體注射進入微流體裝置，控制流速為50-100微升/分鐘，使核酸適體與微室中的靶細胞結合；

S3、將洗滌緩沖液注射進入微流體裝置，通過改變洗滌時間和洗滌緩沖液流速來控制篩選壓力，收集洗脫液，將洗脫液中的核酸適體即為篩選后所得的核酸適體；其中，改變洗滌時間的范圍為3-10分鐘，控制洗滌緩沖液的流速為50-100微升/分鐘;

所述微流體裝置包括微流體通道(1)，所述微流體通道(1)設有輸入口(2)和輸出口(3)，所述微流體通道(1)內腔底部設有若干個用于分配單個細胞的微室(4)。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，設計和合成的核酸適體文庫序列如SEQIDNO.1所示。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，篩選后所得的核酸適體的序列如SEQ IDNO.2和SEQ ID NO.3所示。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，設計和合成的核酸適體文庫序列如SEQ IDNO.4所示。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，篩選后所得的核酸適體序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述微流體通道(1)呈U型折流布置。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述微流體通道(1)的長、寬、高均為20±0.5微米；所述微室(4)的直徑為20±0.5微米，微室(4)的深度為20±0.5微米；彼此相鄰的微室(4)之間的間距為2200-2400微米。