[發(fā)明專利]用于檢測奶牛三種隱性遺傳缺陷病的引物對及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711000104.2
• 申請日: 2017-10-24
• 公開（公告）號: CN107653316B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇銳;郭鵬;何江;韓澤州;張碧飛
• 申請（專利權(quán)）人: 中北大學(xué);山西省畜牧遺傳育種中心
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京世譽(yù)鑫誠專利代理有限公司 11368
• 代理人: 魏秀枝

本發(fā)明公開了用于檢測奶牛三種隱性遺傳缺陷病的引物對及其應(yīng)用，其中，第一對引物由序列表中SEQ NO.1和SEQ NO.2所示的寡核苷酸序列組成，第二對引物由序列表中SEQ NO.3和SEQ NO.4所示的寡核苷酸序列組成，第二對引物由序列表中SEQ NO.3和SEQ NO.4所示的寡核苷酸序列組成；前述的三對引物可以應(yīng)用在制備用于診斷CVM、BLAD、DUMPS這三種隱性遺傳缺陷病的試劑盒中。本發(fā)明的有益之處在于：應(yīng)用高分辨率熔解曲線技術(shù)和本發(fā)明提供的三對引物可實現(xiàn)對奶牛的CVM、BLAD、DUMPS這三種隱性遺傳缺陷病的基因突變位點進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果與測序法結(jié)果一致，并且具有操作簡單、快速、高通量的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用于檢測疾病的引物對及其應(yīng)用，具體涉及用于檢測奶牛脊椎畸形綜合征(CVM)、白細(xì)胞粘附缺陷病(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏癥(DUMPS)這三種隱性遺傳缺陷病的引物對及其在制備用于診斷奶牛脊椎畸形綜合征(CVM)、白細(xì)胞粘附缺陷病(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏癥(DUMPS)這三種隱性遺傳缺陷病的試劑盒中的應(yīng)用，屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

遺傳缺陷多數(shù)是由缺陷基因引起的，具有先天性和家族性特征。遺傳缺陷會使發(fā)育個體出現(xiàn)生理功能的損害，可以致畸、半致死或致死，從而影響家畜的生活力，降低經(jīng)濟(jì)價值，給畜牧生產(chǎn)帶來了損失。美國荷斯坦牛協(xié)會公牛系譜記錄的遺傳疾病共有13類，其中奶牛脊椎畸形綜合征(CVM)、白細(xì)胞粘附缺陷病(BLAD)、尿苷酸合酶缺乏癥(DUMPS)是最常見的三種常染色體隱性遺傳疾病。

脊椎畸形綜合征(Complex Vertebral Malformation，CVM)是荷斯坦牛的一種由常染色體單基因控制的隱性遺傳病。該病的發(fā)生是由于編碼UDP-N-乙酰葡糖胺載體的溶質(zhì)轉(zhuǎn)運家族35-3(SLC35A3)基因第4外顯子559處發(fā)生G→T突變，導(dǎo)致180處纈氨酸置換為苯丙氨酸，致使異常的核苷酸糖轉(zhuǎn)運到高爾基體。其主要癥狀為早期流產(chǎn)、早產(chǎn)和死胎，出生的患病犢牛體型較小、體重偏輕、頸部較短、頸部胸部脊椎骨或肋骨出現(xiàn)各式各樣的病變、同時四肢關(guān)節(jié)僵直、呈現(xiàn)對稱的向后方翻轉(zhuǎn)彎曲。另外，脊椎畸形綜合征對奶牛的繁殖性狀也有很大的影響，母牛的不返情率提高，產(chǎn)犢間隔大大延長，流產(chǎn)比例增加。

白細(xì)胞粘附缺陷病(Bovine Leukocyte Adhesion Deficiency，BLAD)是一種牛的造血系統(tǒng)遺傳性疾病。本病病因與人的白細(xì)胞粘附缺陷病相同，為白細(xì)胞表面的粘附分子(整合素)CDl8亞單位編碼序列383位堿基由A突變?yōu)镚所致，相應(yīng)的位于胞外高度保守區(qū)的128位天門冬氨酸變成了甘氨酸，致使白細(xì)胞表面的CDl8整合素亞單位表達(dá)明顯減少或缺乏，導(dǎo)致機(jī)體在炎癥反應(yīng)時外周血液中的白細(xì)胞不能通過自身整合素與血管內(nèi)皮粘附分子相互作用而黏附到血管內(nèi)皮上，最終無法穿過血管壁到達(dá)病原侵入部位和對病原體直接做出反應(yīng),進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體發(fā)病。患牛常發(fā)生口腔粘膜及舌粘膜潰瘍，牙齦萎縮，病程長者前臼齒脫落。粘膜和腸道等軟組織發(fā)生反復(fù)性感染，泛發(fā)性淋巴樣增生；胃腸粘膜潰瘍、慢性腹瀉，生長發(fā)育受阻，最終導(dǎo)致早期死亡。

尿苷酸合酶缺乏癥(Deficiency of uridine monophophate synthase，DUMPS)又稱單譜癥，是導(dǎo)致荷斯坦牛胚胎早期死亡的一種遺傳缺陷。其遺傳學(xué)基礎(chǔ)是奶牛1號染色體q31區(qū)(BTAI)上的UMPS基因C-末端密碼子405處存在著一個C/T點突變，可導(dǎo)致原來編碼精氨酸的“CGA”轉(zhuǎn)變?yōu)榫幋a終止密碼子的“TGA”，導(dǎo)致基因編碼產(chǎn)物催化亞基C-末端缺失76個氨基酸。其主要癥狀為血液中瓜氨酸含量升高，尿素循環(huán)受阻引起高氨血癥，從而導(dǎo)致犢牛在出生一周內(nèi)死亡，或者母牛懷孕約40天左右時流產(chǎn)。

目前，針對這三種遺傳缺陷病已經(jīng)建立了一些分子檢測技術(shù)，如等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析法(SSCP)、SNP芯片檢測法等等。