[發(fā)明專利]一種肺炎鏈球菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710990658.5
• 申請日: 2017-10-23
• 公開（公告）號: CN107586744B
• 公開（公告）日: 2020-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂新;陳麗華;李玥仁;黃薇;劉蘭英
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/46
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 劉奇

本發(fā)明提供了一種肺炎鏈球菌培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基添加劑，其中所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、氯化鈉、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、無水磷酸氫二鈉、氯化鈣，所述培養(yǎng)基添加劑含有至少一種血清蛋白。本發(fā)明的培養(yǎng)基的制備方法簡單、成本低廉、擺脫了對CO₂培養(yǎng)環(huán)境的依賴，因而不需要CO₂培養(yǎng)箱。與傳統(tǒng)胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基相比，本發(fā)明的培養(yǎng)基保存使用更方便。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種肺炎鏈球菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)是威脅人類健康的主要病原菌之一。可引起大葉性肺炎、嬰幼兒腦膜炎、中耳炎和心內(nèi)膜炎等疾病。誘發(fā)較高的發(fā)病率和死亡率，在嬰幼兒、老年人以及免疫缺陷病人中多發(fā)。

肺炎鏈球菌屬革蘭染色陽性菌，兼性厭氧菌，其生長對培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)均要求嚴(yán)苛。美國模式培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)作為全球知名的微生物保藏機(jī)構(gòu)，推薦了兩種肺炎鏈球菌培養(yǎng)基：腦心浸液培養(yǎng)基和胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基。腦心浸液培養(yǎng)基，其配方如下：牛腦浸粉7.7g、牛心浸粉9.8g、蛋白胨10g、葡萄糖2g、氯化鈉5g、磷酸氫二鈉2.5g、水1000ml。胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基，其配方如下：胰蛋白胨15g、大豆胨5g、氯化鈉5g、水1000ml，滅菌后加入終濃度5％脫纖維羊血。

但上述兩種培養(yǎng)基在肺炎鏈球菌培養(yǎng)時均存在問題，使用腦心浸液培養(yǎng)基培養(yǎng)肺炎鏈球菌，必須在5-10％CO₂濃度下才能良好生長，而提供CO₂的培養(yǎng)環(huán)境需要CO₂培養(yǎng)箱，但一般微生物實驗室不一定具備這樣的實驗設(shè)備，從而限制了肺炎鏈球菌試驗的開展。而且腦心浸液培養(yǎng)基因含有牛腦浸粉和牛心浸粉兩種特殊營養(yǎng)物質(zhì)，使其相較普通微生物培養(yǎng)基價格高出許多。使用胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基，因加入終濃度5％脫纖維羊血，雖然不需要在5-10％CO₂濃度下肺炎鏈球菌也能良好生長，但脫纖維羊血一來價格昂貴、二來保存時間很短(4度冰箱保存二周)，若不能及時使用完，將帶來浪費而增加實驗成本，也給肺炎鏈球菌培養(yǎng)工作造成諸多不便和麻煩。因此，尋找一種適合于肺炎鏈球菌生長的成本低廉、保存使用方便，可以完全擺脫肺炎鏈球菌培養(yǎng)對CO₂培養(yǎng)環(huán)境和脫纖維羊血嚴(yán)苛要求的液體培養(yǎng)基，將對肺炎鏈球菌研究開展起到積極的促進(jìn)作用，也是本發(fā)明重點解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種肺炎鏈球菌培養(yǎng)基，包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和培養(yǎng)基添加劑，其中所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、氯化鈉、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、無水磷酸氫二鈉、氯化鈣，所述培養(yǎng)基添加劑含有至少一種血清蛋白。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的肺炎鏈球菌培養(yǎng)基中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括以下成分：蛋白胨15-25g、牛肉粉3-5g、酵母粉3-6g、葡萄糖1-3g、氯化鈉1-3g、氫氧化鈉0.5-1.5g、碳酸氫鈉1-3g、無水磷酸氫二鈉0.2-0.5g、氯化鈣0.1-0.2g、蒸餾水加至1000ml。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的肺炎鏈球菌培養(yǎng)基中，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基包括以下成分：蛋白胨20g、牛肉粉5g、酵母粉5g、葡萄糖2g、氯化鈉2g、氫氧化鈉1g、碳酸氫鈉2g、無水磷酸氫二鈉0.4g、氯化鈣0.1g、蒸餾水加至1000ml。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的肺炎鏈球菌培養(yǎng)基中，所述血清蛋白為牛血清蛋白；更優(yōu)選地，所述血清蛋白為5％-10％牛血清蛋白；更優(yōu)選地，所述血清蛋白為終濃度0.1％-0.5％牛血清蛋白；最優(yōu)選地，所述血清蛋白為終濃度0.2％牛血清蛋白。

本發(fā)明的另一方面為提供一種肺炎鏈球菌培養(yǎng)基的配制方法，包括以下步驟：將上述肺炎鏈球菌培養(yǎng)基中基礎(chǔ)培養(yǎng)基中各個組分按比例混合，完全溶解、高壓滅菌后，加入培養(yǎng)基添加劑，即得肺炎鏈球菌培養(yǎng)基。